Recombinaison homologue à l'échelle de la molécule unique
Institution:
Paris 6Disciplines:
Directors:
Abstract EN:
In this thesis, we study homologous recombination at the single molecule level. We ¯rst introduce the physico-chemical characteristics of RecA and hRad51, the main proteins involved in homologous recombination in E. Coli bacteria and in humans. Then, we present some experiments on homologous recombination perfor- med with magnetic tweezers. We ¯rst study RecA-mediated strand exchange. We then address the study of the human analog of RecA, the protein hRad51. The ki- netics of the polymerisation and the torsional behavior of hRad51 nucleo¯laments are presented. Preliminary results on hRad51-mediated strand exchange are also described. Finally, we develop a single molecule set-up called tomotweezers, combining magnetic tweezers and °uorescence measurements. This set-up allows us to stretch a single DNA molecule, to control its topology and to observe °uorescent proteins near the molecule.
Abstract FR:
Dans ce mémoire , nous nous intéressons à la recombinaison homologue à l’échelle de la molécule unique. Tout d’abord , nous présentons l’état de nos connaissances sur la recombinaison homologue chez la bactérie E. Coli, puis chez l’Homme. Nous présentons ensuite des expériences sur la recombinaison homologue à l’échelle de la molécule unique réalisées à l’aide d’un montage de pinces magnétiques. Nous nous sommes tout d’abord intéressés à l’ étude de l’échange de brins médié par Rec A, la protéine centrale de la recombinaison homologue chez E. Coli. Nous avons ensuite abordé l’étude de la protéine h Rad 51, l’analogue humain de Rec A. Une étude de la cinétique de polymérisation et du comportement torsionel des nucléofilaments h Rad51 est présenté. Quelques résultats préliminaires sur l’ échange de brins médié par la protéine hRad51 sont également abordés. Enfin , nous présentons de nouvelles techniques permettant d’étudier la recombinaison homologue. Un montage de pinces magnétiques combinées à de la flurescence a été développé. Nous avons montré qu’il est possible d’étirer une molécule d’ ADN, de la contraindre en torsion tout en visualisant des molécules fluorescentes dans son voisinage proche.