Abstract FR:

Chez les plantes superieures, le complexe de la glycine decarboxylase possede une role cle dans le cycle de la photorespiration. Il catalyse la decarboxylation oxydative de la glycine grace a l'action concertee de quatre enzymes (p, h, t, l). La proteine h, qui contient un groupement lipoate lie de facon covalente a un residu lysine, joue un role central dans le mecanisme reactionnel. Elle se comporte comme un veritable substrat et interagit successivement avec les trois autres proteines. Durant le cycle catalytique, son cofacteur, le lipoate, passe alors de la forme oxydee (hox), a la forme chargee en methylamine puis a la forme reduite (hred). Afin d'ameliorer la comprehension du mode de fonctionnement de la glycine decarboxylase, des etudes structurales et biochimiques de la proteine h ont ete realisees. Dans un premier temps, des echantillons uniformement marques 1 5n et/ou 1 5n/ 1 3c des formes hapo (apoproteine h), hox et hmet ont ete produits et purifies pour obtenir l'attribution des signaux de resonances de ces differentes formes. Afin de comprendre les interactions specifiques entre chaque forme de la proteine h, dont les structures cristallographiques sont tres proches, et son partenaire dans le cycle catalytique, les differences structurales provoquees en solution par la presence du cofacteur ont ete analysees grace a des mesures de deplacement chimique 1h et 1 5n. Des modifications dynamiques ont egalement ete mises en evidence par des etudes de relaxation 1 5n. A l'aide d'experiences biochimiques, noesy filtrees 1 3c et de relaxation 1 3c, nous avons demontre que le bras lipoate charge en methylamine est bloque dans une crevasse de la proteine. Grace a des etudes structurale et biochimique, nous avons alors montre qu'une activation de la proteine hmet par la proteine t est necessaire pour expliquer la seconde etape du cycle catalytique. Ces resultats ont permis de proposer un modele reactionnel pour l'etape catalytique impliquant les proteines hmet et t.