Abstract FR:

La pro-urokinase est une glycoproteine appartenant a la famille des serine-proteases. Elle contient 24 residus cysteine impliques dans 12 ponts disulfure, distribues dans ses trois domaines successifs : les domaines facteur de croissance et kringle relies au domaine catalytique par un peptide de connexion. Sa principale fonction est d'activer le plasminogene en plasmine, soit au niveau d'un caillot sanguin, soit a la surface cellulaire de nombreuses cellules. Elle parait etre un agent therapeutique aussi efficace que l'activateur tissulaire du plasminogene dans le traitement de patients atteints d'infarctus du myocarde. Cependant, elle n'a pas toutes les proprietes souhaitees. D'autre part, un autre interet majeur de la pro-urokinase est son role central dans la regulation de la proteolyse extracellulaire dans divers processus normaux ou pathologiques impliquant une degradation tissulaire et une migration cellulaire. Differents mutants de la pro-urokinase peuvent, soit permettre un traitement plus efficace dans les desordres thrombolytiques, soit inhiber les processus de dissemination d'un cancer et la migration de metastases. Pour les concevoir, il a ete necessaire de connaitre les relations structure/fonction de la pro-urokinase. Celles-ci ont ete etudiees par le biais de la mutagenese dirigee. Dans la premiere serie de mutants, un certain nombre de residus cysteine est remplace par des residus serine, dans le but de determiner l'importance des differents ponts disulfure dans le maintien des activites catalytiques et dans la specificite de fixation de la pro-urokinase sur le recepteur. Dans les autres mutants construits, des acides amines du domaine facteur de croissance sont remplaces de maniere aleatoire par d'autres acides amines, dans le but de determiner les acides amines impliques dans cette liaison. Apres expression chez e. Coli, denaturation et renaturation, les differentes pro-urokinases recombinantes mutantes sont testees pour les activites citees ci-dessus. Les ponts disulfure du domaine catalytique sont indispensables au maintien de l'activite catalytique de la pro-urokinase. Par contre, ceux des domaines facteur de croissance et kringle ne le sont pas pour cette activite. Celle-ci double lorsque les ponts disulfure du domaine kringle sont supprimes. Les autres resultats obtenus font l'objet d'un brevet depose le 23 mars 1995.