Abstract FR:

La silice possède la plupart des qualités requises des phases stationnaires utilisables en chromatographie liquide haute performance (hplc). Cependant, la présence de charges négatives à sa surface rend difficile son utilisation à l'état natif. Une modification de la surface de la silice est réalisée par adsorption d'une couche de dextrane substitué par une quantité optimisée de groupements diethylaminoethyles. La minimisation des d'interactions non spécifiques et le caractère hydrophile de ces supports permettent le couplage de ligands bispécifiques et l'utilisation de ces supports modifiés en chromatographie d'affinité liquide haute performance (hplac) des produits biologiques. L'utilisation de ces supports en hplac demande une meilleure connaissance des diverses caractéristiques de ces phases stationnaires. Pour cela, nous avons eu recours simultanément à plusieurs techniques, en particulier, la chromatographie d'exclusion stérique, l'adsorption d'albumine radio marquée, la microscopie électronique et la microscopie à effet de force. Ces méthodes permettent d'obtenir des informations complémentaires sur les caractéristiques de ces supports. Le greffage du poly(n-isopropylacrylamide), polymère thermosensible, nous a permis la mise au point d'un nouveau support chromatographique dont les performances dépendent de la température externe du milieu. Les supports de silice enrobée sont ensuite fonctionnalisés par divers ligands présentant une spécificité pour l'insuline et les immunoglobulines g (IGG), l'acide sialique, la n-acetylglucosamine ainsi que les ligands thiophiliques. L'affinité de ces supports vis-à-vis de diverses formes d'insulines et des IGG a été déterminée par établissement des isothermes d'adsorption et par hplac, afin de mettre en évidence les relations entre les caractéristiques structurales des supports et leurs propriétés de séparation. L'étude de l'influence des paramètres physico-chimiques sur les interactions supports-protéines, nous a permis de mettre en évidence l'importance de la méthode de couplage, ainsi que l'optimisation des conditions d'élution. Ces supports sont utilisés pour la séparation des différentes formes d'insuline et également pour la purification des IGG et de l'insuline à partir respectivement des ascites de souris et d'extraits pancréatiques. Afin de mimer le site de fixation du récepteur à l'insuline, nous avons préparé des supports greffes simultanément par l'acide sialique et par la n-acetylglucosamine et étudié la spécificité de ces supports