Caractérisation des intermédiaires du repliement de la phosphoglycérate kinase : utilisation des ligands spécifiques en tant que sonde conformationnelle et fonctionnelle
Institution:
Paris 11Disciplines:
Directors:
Abstract EN:
This work deals with the pathway of folding of horse muscle phophoglycerate kinase. Equilibrium as well as kinetic studies using different signals (fluorescence emission intensity at 336 nm after excitation at 292 nm, ellipticity at 220 nm, enzyme activity) showed the existence or intermediates in the folding pathway. A kinetic intermediate formed during the fast phase of refolding has been identified. Another intermediate, stable under equilibrium conditions at 4° C in 0,7 M GdnHCl, and devoid of enzymic activity, subsequently forms aggregates when the temperature is raised (23°C). The role of specific ligands of the enzyme in the folding pathway is investigated and a plausible model accounting for most of the data is proposed.
Abstract FR:
L'objet de ce travail porte sur le repliement de la phophoglycérate kinase du muscle du cheval. Des études à l'équilibre et des études cinétiques utilisant différents signaux (intensité d'émission de fluorescence à 336 nm après excitation à 292 nm, ellipticité à 220 nm, activité enzymatique) ont révélé l'existence d'intermédiaires dans le chemin du repliement. Un intermédiaire cinétique formé dans une phase rapide du repliement a été détecté. Un autre intermédiaire dans lequel le domaine C-terminal est totalement ou partiellement structuré mais qui ne possède pas d'activité enzymatique est stable à l'équilibre à 4°C en 0,7 M GdnHCl. Lorsque la température augmente, il s'agrège via des interactions hydrophobes pour former des espèces polymériques. Le rôle des ligands spécifiques de l'enzyme sur la conformation et la stabilité de la PGK a été étudié et un modèle plausible compatible avec les résultats expérimentaux est proposé.