Régulation de la polymérisation de l'actine : implication des sous domaines I et III de l'actine, sites d'interaction de la gelsoline et de la protéine transporteuse de la vitamine D
Institution:
Toulouse 3Disciplines:
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Au cours de ce travail, nous avons aborde l'etude de la regulation de la polymerisation de l'actine par diverses proteines associees. Nous avons ainsi mis en evidence l'importance fonctionnelle de la region cooh-terminale de l'actine. En effet, differentes zones d'interaction sur l'actine de proteines telles la gelsoline et la proteine transporteuse de la vitamine d ont ete localisees dans cette region. Ces interfaces ont ete precisees a l'aide d'un fragment representatif de cette region de l'actine (sequence 285-375) au moyen de la chromatographie d'affinite et en fluorescence. De plus, une approche immunologique par elisa a ete utilisee pour confirmer ces resultats. Ces differentes methodologies appliquees a des peptides obtenus par synthese ou par coupure enzymatique ont permis de caracteriser des interfaces entre l'actine et ces proteines. Parallelement, en utilisant des sondes immunologiques dont nous avons prealablement defini la specificite, une sequence impliquee dans la polymerisation de l'actine a ete identifiee autour du residu met 305. Enfin, il a ete possible de mettre en evidence une interaction entre l'actine f et une enzyme impliquee dans la regeneration de l'energie chimique (atp), l'arginine kinase et localiser deux sites de liaison de cette enzyme au niveau de l'actine