Effet et mécanisme d'action des acides gras d'origine marine sur l'expression de l'isoforme constitutive de la prostaglandine H synthaxe au sein des cellules endothéliales aortiques bovines
Institution:
Lyon, INSADisciplines:
Directors:
Abstract EN:
The aim of our study was to evaluate the effects of marine fatty acids (n-3 fatty acids), especially eicasapentaenoic (EP A) and docosahexaenoic (DHA) acids, on the expression of the constitutive isoform of prostaglandin H synthase, namely PGHS-1, in bovine aortic endothelial cells (BAEC). Previous studies of our group have shown that BAEC enrichments with EPA or DHA, leading to fatty acids accumulation into lipids stores, reduce the cell capacity to produce prostacyclin from endogenous or exogenous arachidonic acid (AA). Western blot analysis showed that EPA and DHA reduce PGHS-1 amount in BAEC. Using northern blotting we showed that n-3 fatty acids decreased PGHS-1 mRNA amount without affecting its stability, suggesting that the depressing effect of n-3 fatty acids on PGHS-1 expression was likely to be due to an inhibition of the gene transcription. We then tried to elucidate the mechanism by which n-3 fatty acids inhibit PGHS-1 expression. As in our enrichment conditions EPA and DHA delocalised AA, we studied the effect of AA on PGHS-1 amount. We observed that in spite of its mimetic effect on PGHS-1 amount, AA did not seem to be responsible for the n-3 fatty acids inhibition of PGHS-1 expression. We also showed that EPA and DHA induce an increase in cellular oxidative stress, as shown by the malondialdehyde (MDA) level. In addition, we showed that H20 2, a potent inducer of oxidative stress, decrease PGHS-1 amount, suggesting that oxidative stress generated by n-3 fatty acids could be responsible for their effect on PGHS-1 expression. However, additional experiments are still needed to conclude in a definitive manner. In the last part of our work, we investigated the effects of n-3 fatty acids on the expression of the inducible isoform of PGHS, namely PGHS-2. Our results indicate that DHA, and to a lesser extent EPA, dramatically increase PMA-induced PGHS-2 expression, as shown by western blot experiments.
Abstract FR:
Le but de ce travail était d'étudier les effets des acides gras n-3 (acides eicosapentaénoïque (EPA) et docosahexaénoïque (DHA)) sur l'expression de l'isoforme constitutive de la prostaglandine H synthase (PGHS-1) au sein des cellules endothéliales aortiques bovines. Des travaux antérieurs réalisés au sein du laboratoire ont montré que 1' enrichissement des cellules avec 1' EP A ou le D HA diminuait la capacité des cellules à synthétiser de la prostacycline. Après avoir montré par «western blotting» que l 'EPA et le DHA diminuaient la quantité de PGHS-1 cellulaire, nous avons montré par «northem blotting» qu'ils diminuaient le taux d' ARNm correspondant sans en affecter la stabilité. Ces résultats suggèrent que la diminution de 1' expression de la PGHS-1 induite par les acides gras n-3 est probablement d'origine transcriptionnelle. Nous nous sommes ensuite attachés à déterminer le mécanisme d'action des acides gras n-3 sur l'expression de la PGHS-1. Dans nos conditions, les enrichissements en EPA et DHA se font principalement aux dépens de 1' AA. Nous avons donc recherché si ce déplacement d'AA pouvait être à l'origine de l'effet inhibiteur des acides gras n-3. Nous montrons que l'AA, bien que mimant l'effet de l'EPA et du DHA, ne semble pas être responsable de l'inhibition de l'expression de la PGHS-l. Par ailleurs, nous montrons qu'un enrichissement en EPA et en DHA augmente le stress oxydant cellulaire et qu'un stress induit par l'H202, oxydant puissant, est capable de reproduire l'effet des acides gras n-3. Il semble donc que le stress oxydant engendré par l'EPA et le DHA puisse être à l'origine de leur effet inhibiteur sur 1' expression de la PGHS-1. Dans une troisième partie nous avons voulu déterminer si 1' effet des acides gras n-3 était spécifique de l'expression de la PGHS-1 ou s’il s'exerçait également sur l'expression de l'isoforme inductible (PGHS-2). Bien que de manière moins sure, il semble que l'EPA et le DHA potentialisent l'expression de la PGHS-2.