Clonage, expression et caractérisation de l'anticorps catalytique 4B2
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Depuis quinze ans, le développement des anticorps catalytiques a permis de générer des biocatalyseurs pour une centaine de réactions différentes avec des facteurs d'accélération le plus souvent modestes. Au sein du laboratoire, un anticorps catalytique a été généré en 1997 sur la base de la stratégie du "bait and switch". Cet abzyme, 4B2, catalyse une réaction d'élimination de Kemp ainsi qu'une réaction d'isomérisation allylique. L'objectif de cette thèse a été d'exprimer cet anticorps sous forme recombinante pour étudier son mécanisme catalytique et envisager son évolution. Le fragment simple-chaîne de la région variable (scFv) de l'anticorps 4B2 a été cloné et surexprimé chez E coli. Ce fragment est exprimé sous forme de corps d'inclusion au sein du cytoplasme. . .