Analyse biochimique du bis (monoacylglycérol) phosphate dans les cellules monocytes THP-1 et étude de son rôle sur le trafic intracellulaire du cholestérol
Institution:
Lyon, INSADisciplines:
Directors:
Abstract EN:
The aim of this work was to characterize Bis(Monoacylglycérol)Phosphate (BMP) in THP-1 macrophages, and to investigate its possible role on the regulation of cholesterol homeostasis. Using immunofluorescence, we showed that BMP is quasi-exclusively localized in late endosomes. In THP-1 macrophages, BMP represents about 1 - 2% of total phospholipids. Analysis of fatty acid methyl esters of BMP by gaz chromatography reveals a high proportion of oleic acid. In addition, BMP is enriched in polyunsaturated fatty acids, in particular docosahexaenoic acid (DHA). When THP-1 macrophages were incubated with exogenous DHA, DHA was more efficiently incorported into BMP compared to other phospholipids. In contrast, exogenous arachidonic acid was not incorporated into BMP whereas it is present in endogenous BMP. These results suggest that DHA is selectively incorporated into BMP compared to other fatty acids. Similar observations were done in baby hamster kidney cells. Our study also supports the role of BMP in intracellular transport of cholesterol. When macrophages are incubated with anti-BMP antibody, the antibody is internalized and accumulates in late endosomes. Accumulation of anti-BMP antibody was correlated to cholesterol accumulation in late endosomes. Several metabolic pathways of low density lipoproteine-derived cholesterol were investigated. Our results suggest that anti-BMP antibody affects high density lipoprotein-mediated cholesterol efflux.
Abstract FR:
L’objectif de ce travail a été de caractériser le Bis(Monoacylglycérol)Phosphate (BMP) dans les macrophages issus de la lignée monocytaire humaine THP-1, ainsi que d’appréhender son rôle possible dans la régulation de l’homéostasie du cholestérol. Nous avons montré par immunofluorescence que le BMP est localisé de façon quasi-exclusive au niveau des endosomes tardifs. Dans les macrophages THP-1, le BMP représente environ 1 à 2% des phospholipides totaux. L’analyse en chromatographie en phase gazeuse des esters méthyliques des acides gras du BMP cellulaire révèle une majorité d’acide oléique. Le BMP présente en outre une richesse particulière en acides gras poly insaturés, notamment en acide docosahexaénoïque ou DHA. Lors de l’incubation des macrophages THP-1 avec du DHA exogène, nous avons observé que cet acide gras est incorporé de façon importante dans le BMP comparativement aux autres phospholipides. A l’inverse, bien qu’entrant dans la composition du BMP à l’état basal, nous n’avons constaté aucune incorporation d’acide arachidonique exogène. Nos différents résultats suggèrent une sélectivité d’incorporation du DHA dans le BMP, comparativement aux autres acides gras. Nous avons également observé cette sélectivité dans une lignée cellulaire de fibroblastes de hamster, suggérant un métabolisme commun dans les cellules de mammifères. Ce travail a également mis en évidence l’implication du BMP dans le trafic intracellulaire du cholestérol. Lorsque les macrophages en culture sont incubés en présence de l’anticorps anti-BMP, l’anticorps est internalisé et s’accumule dans les endosomes tardifs. Cette accumulation est associée à celle du cholestérol dans ces endosomes. L’étude des différentes voies métaboliques du cholestérol dérivé des lipoprotéines de basse densité suggère que l’anticorps anti-BMP diminue l’efflux du cholestérol médié par les HDL.