Protéines activées par le calcium et les phospholipides (annexines et protéine kinase C) dans les cellules endothéliales vasculaires : [thèse en partie soutenue sur un ensemble de travaux]
Institution:
Toulouse 3Disciplines:
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Apres une revue bibliographique sur les cellules endotheliales vasculaires (cev) et les annexines (anx), nous decrivons l'etude de ces proteines et des mecanismes cellulaires anti-inflammatoires des glucocorticoides. Un extrait d'anxs est obtenu a partir d'un homogenat de cev par precipitation selective avec les membranes en milieu calcique, suivi d'une extraction par un chelateur de calcium. Apres purification, les axns 1, 2, 5 et 6 ont ete caracterisees. L'immunodetection des anxs dans les homogenats cellulaires et les extraits, leur marquage metabolique avec la 35s-methionine et l'activite anti-phospholipase a2 des extraits montrent que la biosynthese des ansx n'est pas modifiee dans des cev traitees par la dexamethasone, remettant ainsi en cause la notion de lipocortine. L'ans 1 de cev est un substrat, in vitro, de la proteine kinase c (pkc) preparee a partir de cerveau de rat ou de cev. Mais, dans des cev traitees par les esters de phorbol. L'anx a n'est pas phosphorylee. De plus, nous montrons que l'anx 5 entre en competition avec l'anx 1 et la pkc pour se lier aux phospholipides et ainsi inhiber la phosphorylation de l'anx 1 in vitro. Ceci pourrait expliquer l'absence de phosphorylation de l'anx 1 dans les cev exprimant aussi l'anx 5 et conferer a celle-ci un role d'inhibiteur physiologique de pkc. L'immunodetection en microscopie a fluorescence et electronique de l'anx 1 dans les cev montre qu'elle est localisee a proximite de la membrane plasmique mais egalement dans le noyau, ce qui ouvre de nouvelles perspectives sur son role biologique