Relation structure-fonction dans la famille des guanidino kinases
Institution:
Lyon 1Disciplines:
Directors:
Abstract EN:
The first part of this thesis describes the comparative unfolding of guanidino kinases with differing quaternary structure (monomer, dimer or octamer). These enzymes catalyze the reversible transfer of the ATP γ phosphate to a guanidylic acceptor (creatine, arginine). We have shown, that for dimer or octamer creatine kinases, association of subunits is required for expression of catalytic activity. However, a higher level of quaternary structure does not provide these enzymes an increased conformational stability as compared to a monomeric arginine kinase. In a second part, we describe the characterization of a new guanidino kinase displaying a duplicated structure and which is expressed in Schistosoma mansoni cercariae. We have developed expression and purification protocols for the untagged protein, identified its physiological substrates, defined its enzymatic parameters in the direction of phosphagene formation, crystallized this enzyme and determined its three-dimensional structure by X-ray diffraction
Abstract FR:
La première partie de cette thèse décrit la dénaturation comparée de plusieurs guanidino kinases (GdnK) de structures quaternaires variées (monomère, dimère ou octamère). Ces enzymes catalysent le transfert réversible du phosphate γ de l’ATP vers un accepteur guanidylique (créatine, arginine). Nous avons montré que, pour les créatine kinases multimériques, l’association des sous-unités est requise pour l’expression de l’activité enzymatique mais que cette association ne leur apporte pas une plus grande stabilité conformationnelle par rapport à une arginine kinase monomérique. Dans la seconde partie, nous décrivons la caractérisation d’une nouvelle guanidino kinase à la structure dupliquée qui est exprimée dans les cercaires de Schistosoma mansoni. Nous avons mis au point un protocole d’expression et de purification pour cette enzyme, identifié ses substrats physiologiques, défini les paramètres enzymatiques pour ces substrats dans le sens de formation du phosphagène, cristallisé cette enzyme et résolu sa structure tridimensionnelle par diffraction des rayons X