Effet d'un hydroperoxyde lipidique et des LDL oxydées sur les enzymes impliquées dans la libération de l'acide arachidonique des phospholipides plaquettaires
Institution:
Lyon, INSADisciplines:
Directors:
Abstract EN:
Many studies have shown the significant role of lipid peroxides in vascular diseases associated with pathologies such as diabetes, as well as their potential involvement in platelet hyperactivity occuring during atherothrombosis. The aim of our studies was to investigate the effect of an oxidative stress induced by endogenous lipid hydroperoxides or modified LDL on the platelet signaling pathways leading to arachitonic acid(AA) release from membrane phospholipids and eventually to the formation of the proaggregatory thromboxane A2 (TxA2). In the first part, we show that 12-hydroperoxy-eicosatetraenoic acid (12-HpETE), issued from AA via 12-lipoxygenase, activates p38 MAPK and its substrate, cytosolic A2 (cPLA2 alpha). A decreased esterified AA concentration and an increased level of TxB2, the stable catabolite of TxA2, were also observed. Futhermore, partial inhibition of glutathioneperoxidase activity promotes endogenous 12-HpETE formation and leads to an increase of p38 MAPK phosphorylation. Moreover, p38 MAPK was activated in platelets from type 2 diabetic patients, a pathology associated with oxidative stress. In the second part of our work, we show that either oxidized or glycoxidized LDL increase the phosphorylation of both p38 MAPK and cPLA2 as well as in fine the basal platelets concentration of TxB2. On the contrary, native or glycated LDL have no effect on platelets. In addition, increased TxB2 concentration was observed in platelets incubated with LDL isolated from type 2 diabetic patients. In summary, oxidative stress induced by 12-HpETE or modified LDL, activates both p38 MAPK and cPLA2 alpha and results in an increased TxA2 formation. It could play a crucial role in platelet hyperactivity observed in pathologies such as diabetes.
Abstract FR:
De nombreux travaux soulignent le rôle significatif des peroxydes lipidiques dans le risque vasculaire associé à certaines pathologies telles que le diabète. Ils pourraient notamment être impliqués dans l'hyperactivité plaquettaire observée dans les phénomènes d'athérothrombose. L'objectif de nos travaux a été d'étudier l'effet d'un stress oxydant, induit par des hydroperoxydes lipidiques endogènes ou des LDL modifiées, sur les voies de signalisation plaquettaire conduisant à la libération de l'acide arachidonique (AA) des phospholipides membranaires (PL) et à la formation d'un des métabolites proagrégants de l'AA, le thromboxane A2 (TxA2). Dans la première partie du travail, nous montrons que l'acide 12-hydroperoxy-eicosatétraénoïque (12-HpETE), hydroperoxyde dérivé de l'AA via la 12-lipoxygénase, active la p38 MAPK et l'un de ses substrats, la phospholipase A2 cytosolique (cPLA2α). Ces activations ont été mises en évidence par l'étude du niveau de phosphorylation de ces protéines, ainsi que par l'étude de la translocation de la cPLA2 du cytosol vers la membrane plasmique. Concomitamment à cette double activation, une diminution de la quantité d'AA estérifié dans les PL et une augmentation de la concentration de TxB2, catabolite stable du TxA2, ont été observées. De plus l'inhibition partielle de l'activité de la glutathion peroxydase favorise la formation endogène de 12-HpETE et résulte en une augmentation de la phosphorylation de la p38 MAPK. Par ailleurs, une activation de la p38MAPK a été observée dans les plaquettes issues de patients souffrant de diabète de type 2, pathologie associée à un stress oxydant. Dans la deuxième partie, nous montrons que des LDL oxydées ou glycoxydées in vitro, augmentent la phosphorylation de la p38 MAPK et de la cPLA2 et in fine la concentration basale de TxB2 plaquettaire. Par contre, les LDL natives ou glyquées in vitro sont sans effet sur les plaquettes. De plus, des LDL issues de patients diabétiques de type 2 tendent à activer la p38 MAPK plaquettaire et à augmenter la concentration basale de TxB2. En résumé, le stress oxydant, notamment dû au 12-HpETE ou à des LDL modifiées, active la cPLA2α via la phosphorylation de la p38MAPK et conduit à une formation accrue de TxA2. Il pourrait jouer un rôle non négligeable dans l'hyperfonctionnement des plaquettes sanguines observé dans certaines pathologies comme le diabète.