Abstract FR:

Bien que la chromatographie liquide sur phases inversees soit largement utilisee pour separer des proteines, les mecanismes de retention de ces macromolecules sont mal connus. Afin de mettre en evidence le role de la structure proteique dans ce processus, nous etudions le comportement chromatographique de l'interferon gamma humain recombinant et de son analogue ii, ainsi que de peptides derivant de l'interferon gamma. En effet, l'interferon gamma et l'analogue ii, de structure primaire voisine (asp ou asn 25), peuvent etre separes par gradient d'elution en milieu acide. Nous montrons que la capacite d'un support non poreux pour phases inversees est reliee au parametre s du modele de snyder qui decrit la retention des proteines en gradient d'elution. Ces resultats indiquent que la surface occupee par une molecule est plus grande pour l'interferon gamma que pour l'analogue ii. Pour justifier ces resultats, ces proteines sont etudiees par spectroscopie. La fluorescence resolue en temps apporte des renseignements sur l'heterogeneite de l'environnement du residu tryptophane, sur l'amplitude de flexibilites locales du squelette peptidique ainsi que sur le volume hydrodynamique pour les deux proteines en solution dans l'eluant chromatographique. La spectroscopie infrarouge a transformee de fourier permet d'obtenir des estimations des structures secondaires et des informations sur l'acces des differents sites nh peptidiques aux molecules d'eau pour les deux proteines en solution dans l'eluant ou adsorbees sur un support pour phases inversees. Qu'ils soient dus a l'addition d'acetonitrile ou a l'adsorption, des changements structuraux sont mis en evidence. Ces changements dependent de la structure primaire de la proteine et peuvent expliquer l'ecart des temps de retention entre les deux proteines