Développement d'outils analytiques pour l'étude du mécanisme d'action de la miltefosine (hexadecylphosphocholine) chez les Leishmanies
Institution:
Paris 11Disciplines:
Directors:
Abstract EN:
This study focuses on the development of analytical tools for the elucidation of the mechanism of action of miltefosine in Leishmania. The study focused on the impact of the drug on the lipid composition of membranes of the parasite. To meet the objectives of this work we have put in place technical concerning the overall analysis of lipid classes using a chromatographic technique coupled to two types of universal detectors (ELSD, CAD) and analysis of molecular species of these classes taking advantage of coupling the mass spectrometry (ESI-MS). The response obtained by HPLC- CAD coupling has significant improvement intensity for phospholipids to lowest concentration. These methods are tools for the identification of cellular targets (in lipid metabolism) for the action of miltefosine on cultures of Leishmania parasites. Since the analysis HPLC-ESI/MS produced a large number of ions and thus to interpret information, it is necessary to make a reduction in the number of variables to identify the molecular species involved in the differentiation between strains. A comprehensive analysis was conducted by PLS-DA (preceded by a step orthogonalization) to visualize the differences in the distribution of molecular species between the three types of strains of Leishmania. This work has confirmed the interest of the use of the stationary phase PVA-Sil ® in the analysis of phospholipids and the CAD detector. In addition, this work shows the interest of multivariate evaluation of the spectral information obtained during the LC-MS coupling techniques
Abstract FR:
Ce travail de thèse porte sur le développement d’outils analytiques pour l’élucidation du mécanisme d’action de la miltéfosine chez les leishmanies. L’étude est focalisée sur l’impact du médicament sur la composition lipidique des membranes du parasite. Pour répondre aux objectifs de ce travail nous avons mis en place des techniques concernent soit l’analyse globale des classes lipidiques au moyen d’une technique chromatographique couplée à deux types de détecteurs universels (DEDL, CAD) et l’analyse des espèces moléculaires de ces mêmes classes en tirant profit du couplage à la spectrométrie de masse (ESI-MS). La réponse obtenue par couplage HPLC-CAD présente une importante amélioration d'intensité pour les phospholipides à la plus basse concentration. Ces méthodes constituent des outils pour l’identification de cibles cellulaires (au niveau du métabolisme lipidique) pour l’action de la miltéfosine sur des clones de parasites de Leishmania. Etant donné que l’analyse par HPLC-ESI/MS produit un grand nombre d’ions et donc d’information à interpréter, il est nécessaire d’opérer une réduction du nombre de variables permettant d’identifier les espèces moléculaires impliquées dans la différentiation entre souches. Une analyse globale a été réalisée par PLS-DA (précédée d’une étape d’orthogonalisation) pour visualiser les différences au niveau de la distribution d’espèces moléculaires entre les 3 types de souches de Leishmania. Ce travail a permis de confirmer l’intérêt de l’utilisation de la phase stationnaire PVA-Sil® dans l’analyse des phospholipides ainsi que du détecteur CAD. De plus, ce travail montre l’intérêt des techniques multivariées dans l’évaluation de l’information spectrale obtenue lors du couplage LC-MS.