thesis

Développements de la spectroscopie RMN en biologie structurale et métabolique : études de la protéine SiR-FP60 et du métabolisme végétal

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Jan. 1, 1999

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Ce travail se divise en deux parties distinctes, rmn structurale a une dimension et rmn metabolique a une et deux dimensions. Dans une premiere partie, une analyse quantitative de spectres phosphores de la proteine sir-fp60 native et dans des etats redox connus nous a permis d'ebaucher une structure du site actif de la nadp sulfite reductase (sir). Dans une deuxieme partie, la quantification des spectres d'extraits acides cellulaires de pointes de racines de mais excisees et l'analyse quantitative d'experiences in-vivo nous ont permis d'etudier le signal-sucre et la transition normoxie-anoxie chez les cellules vegetales. Nous avons confirme le role actif des hexokinases dans la reponse adaptative des pointes de racines de mais au manque de substrats carbones exogenes. Nous avons egalement decrit un systeme experimental pour l'utilisation d'un tube rmn de diametre 5 mm. Ce systeme nous a permis d'isoler completement les resonances du lactate, de l'alanine et des lipides qui ont des frequences de resonance proton trop proches a une dimension pour etre totalement separees. Les milieux interne et externe ont ete analyses par spectroscopie proton a une dimension pour suivre la transition brutale vers l'anoxie. Les experiences rmn a deux dimensions se sont revelees indispensables pour l'identification de metabolites dans des extraits acellulaires (cas du glucose-1-phosphate ou du lactate par exemple). Dans une troisieme partie, les proprietes des sequences 2d utilisables in-vivo ont ete analysees et, nous avons montre l'interet de la sequence coloc pour la mesure de la variation de quantite de glucose-1-phosphate, impossible par rmn a une dimension.