Synthèse chimique totale et études biophysiques du domaine de transactivation de la protéine p53 et de ses analogues
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StrasbourgDisciplines:
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Abstract EN:
The N-terminal transactivation domain of p53 (p53TAD) mediates crucial interactions necessary for the initiation of transcription of p53-responsive genes upon cellular stress. This thesis aims to dissect the underlying mechanism of binding and complex formation between intrinsically disordered p53TAD and Nuclear coactivator binding domain of (NCBD) of CBP through a combination of chemical synthesis and biophysical studies. We devised a novel and robust methodology for the chemical synthesis of p53TAD through a combination of SPPS and native chemical ligation. Besides, we also probed the coupled folding and binding of p53TAD with NCBD using p53TAD variants containing post-translational and backbone modifications. In this thesis, we also describe a novel strategy for the synthesis of extensive protein libraries. We expect that the strategies put forwards in this thesis will help us to understand the puzzling biophysics of intrinsically disordered proteins.
Abstract FR:
Le domaine N-terminal de transactivation de la protéine p53 (p53TAD) joue un rôle crucial dans les interactions nécessaires à l’initiation de la transcription des gènes répondant aux stress cellulaires. Cette thèse a pour but de disséquer les mécanismes responsables de l’interaction et de la formation du complexe entre la protéine intrinsèqement désordonnée p53TAD et le domaine de liaison du coactivator nucléaire (NCBD) de CBP. Pour cela, des méthodes de synthèses chimiques combinatoires et de caractérisations biophysiques ont été utilisées. Nous avons conçu une nouvelle méthodologie robuste pour la synthèse chimique de la protéine p53TAD à partir de la combinaison entre la SPPS et la ligation chimique native. Nous avons aussi évalué le repliement couplé à l’association de p53TAD et de NCBD en utilisant des variants de p53TAD contenant des modifications post-traductionnelles et du squelette protéique. Dans cette thèse, nous avons aussi décrit une nouvelle stratégie pour la synthèse en parallèle de larges librairies de protéines. Nous espèrons que les stratégies exposées lors de ces travaux de thèse nous aideront à mieux comprendre la complexité des paramètres biophysiques qui contrôlent les protéines intrinsèquement désordonnées.