thesis

Caractérisation de biofilms à l'interface air-liquide formés par Acinetobacter baumanii

Defense date:

Jan. 1, 2013

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Institution:

Rouen

Disciplines:

Directors:

Abstract EN:

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Abstract FR:

Acinetobacter baumannii est une bactérie opportuniste responsable à l’heure actuelle, de véritables épidémies d’infections nosocomiales à travers le monde. Cette émergence pourrait être due à deux facteurs majeurs remettant en cause son éradication : d’une part, l’apparition de souches multirésitantes aux antibiotiques. D’autre part, la résistance d’A. Baumannii aux produits antiseptiques, associée à une survie prolongée en milieu hospitalier sur les surfaces sèches et sur le matériel médical. Cette persistance pourrait trouver son origine dans la formation de biofilms par cet agent bactérien, en particulier à l'interface air-liquide (pellicules). Précisons que cette caractéristique n’est retrouvée que pour les espèces du genre Acinetobacter présentes à l’hôpital. Dans cette étude nous nous sommes intéressés à ce type de biofilm particulier. Dans un premier temps, nous avons classé les pellicules de 26 isolats cliniques d’A. Baumannii en 3 morphogroupes: i) morphotype oeufs (23%), ii) morphotype boules (50%), iii) morphotype canaux (27%). Les observations en microscopie à l’angle de Brewster et l’évaluation de l’hydrophobicité relative de ces souches ont montré qu’A. Baumannii colonise directement l’interface air liquide et ne requière pas de support solide. L’analyse des glucides totaux de la matrice a montré 3 principaux composants glucose, GlcNac et Kdo. La composition de la matrice des groupes I et III est proche notamment en glucose comme composant principal, alors que au sein du groupe II, c’est le GlcNac qui est majoritaire. Par ailleurs, nous avons identifié trois pilines associées à la matrice: i) CsuaA/B, la sous-unité la plus abondante dans les 3 morphogroupes ce qui confirme l'implication du système pili Csu de type I dans le développement pellicule, ii) la protéine ABYAL1779 appartenant un système chaperonne usher (CU), qui présente 45% d’homologie avec la piline principal F17-A des pili F17chez Escherichia coli entérotoxinogènes, enfin iii) la piline ABYAL2525 d'un deuxième opéron CU bien conservé dans les espèces du complexe ACB. Dans un second temps, nous avons réalisé une analyse protéomique par approche bidimensionnelle afin de déterminer les protéines membranaires fortement impliquées dans la formation de la pellicule. Nous avons comparé le protéome de la souche A. Baumannii A077 (groupe I) cultivée à l’état planctonique et en mode pellicule. Sur 52 spots identifiés, nous avons classé les protéines surexprimées à l'état pellicule en 4 groupes fonctionnels majeurs et constituent de potentiels facteurs de virulence : 3 systèmes d’acquisition et de transport de fer, 3 porines spécifiques, des protéines impliquées dans le métabolisme et le transport de lipides, enfin des protéines appartenant à 3 systèmes de pili dont deux ont été déjà identifié dans la première partie. Enfin, dans le but de lutter contre l’établissement de ces pellicules, nous nous sommes intéressés plus particulièrement aux cibles thérapeutiques que peuvent représenter les pili. Dans cette optique, nous avons testé l'effet d'une molécule pilicide, la virstatine sur la formation de biofilm chez A. Baumannii en mode statique en inhibition et en dispersion puis en mode dynamique en système bioflux. La production de biofilm est diminuée de 38% à 100μM chez A. Baumannii ATCC17978. Nous avons aussi montré que la virstatine agit sur plus de 70% d’isolats cliniques et qu’elle reste active sur la formation de biofilms en mode dynamique. Les résultats de cette étude nous ont permis de mieux comprendre les mécanismes mis en place par A. Baumannii pour former la pellicule. Nous pouvons, par ailleurs, suggérer une relation