thesis

Etude de la prophénoloxydase de "Locusta migratoria" : purification, caractérisation et contrôle de sa transformation en phénoloxydase

Defense date:

Jan. 1, 1994

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Institution:

Montpellier 2

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Abstract FR:

Dans ce travail, nous avons entrepris l'etude de la prophenoloxydase (propo) dans l'hemolymphe de l'insecte locusta migratoria. Dans un premier temps, nous avons mis au point un test fiable et reproductible pour detecter l'activite phenoloxydasique. Puis nous avons etudie les conditions de l'activation de la propo par les serines proteases ou apres declenchement du systeme activateur par les polysaccharides microbiens, lipopolysaccharides (lps) ou beta 1-3-glycane. Ces activites ont ete suivies dans les trois compartiments hemolymphatiques, le plasma, les extraits d'hemocytes et le serum. Dans un deuxieme temps, la propo a ete purifiee a partir du plasma et des extraits d'hemocytes a l'aide de methodes de chromatographie. La propo semble se presenter comme une molecule de 250 kda formee de 3 chaines polypeptidiques associees de facon non covalente. D'autres caracteristiques physico-chimiques suggerent que les propo plasmatique et hemocytaire sont identiques. La presence de quantites comparables de propo dans le plasma et dans les extraits d'hemocytes montre qu'il est peu probable que la propo hemocytaire soit une contamination par la pro-enzyme plasmatique. La presence d'inhibiteur regulant l'activation de la propo apres declenchement du systeme activateur a ete mise en evidence dans le plasma du criquet. Des etapes preliminaires de purification de cet inhibiteur ont ete elaborees. Enfin, un facteur inhibiteur a ete detecte dans le surnageant de culture de la bacterie entomopathogene xenorhabdus nematophilus. Cet inhibiteur semble agir au niveau de l'activite phenoloxydasique