Abstract FR:

Au cours d'une immunoanalyse enzymatique, c'est le produit genere par l'enzyme utilisee comme marqueur qui doit etre sensiblement detecte. L'utilisation d'electrodes modifiees par un film de nafion, polymere polyanionique qui accumule selectivement les cations hydrophobes, permet d'exalter la detection electrochimique du produit enzymatique apres son accumulation dans le film de nafion. Ce concept implique d'une part un couple substrat/produit (s/p) de la phosphatase alcaline (ap), tel que s soit anionique (discrimine par le nafion) et p cationique (accumulation directe mais irreversible dans le nafion), et d'autre part une electrode modifiee par un film de nafion, a usage unique, produite en masse et de faible cout. Nous avons developpe une electrode serigraphiee a base d'une encre de graphite dont nous avons mis au point la formulation. La modification par du nafion est effectuee par depot de 1 l d'une solution diluee de nafion dans l'ethylene glycol pour constituer un film de 1,9 m. Un dosage indirect de l'ap a ete realise avec une limite de detection de 4 10##1#6 m. Apres avoir adapte a des micropuits de 200 l les electrodes serigraphiees et modifiees, nous avons realise deux types differents de dosages enzymatiques par affinite : l'immunoanalyse enzymatique de l'hormone hcg et le dosage de fragments d'adn de cytomegalovirus. Dans les deux cas, lorsque le marqueur enzymatique est l'ap, la detection electrochimique s'est revelee 16 fois plus sensible qu'une detection colorimetrique. Afin de modeliser le comportement de telles electrodes modifiees, nous avons etudie les processus d'accumulation et de diffusion d'especes cationiques dans un film de nafion. Nous avons montre pour deux molecules differentes que la constante de partage ainsi que le coefficient de diffusion evoluent avec l'epaisseur du film de nafion. La simulation mathematique de ces deux variations permet de prevoir l'epaisseur optimale de nafion pour obtenir un courant de pic maximal.