Etude comparative des éléments régulateurs du promoteur II du gène de l'aromatase dans les cellules de granulosa et les cellules lutéales de lapine
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Abstract EN:
The LH surge induces ovulation and luteinization by a modification of the transcritpion rate of several genes of which aromatase gene (cyp19). The decrease of cyp19 trancrit level that is observed in vivo in Rabbit after the LH surge suggests that this gonadotropin could modulate the activity of the ovarian promoter (PII) of cyp19 through cAMP. We showed with transfection and directed mutagenesis experiments that « cAMP responsive element like sequence » (CLS) is the major functional site in granulosa cells. However, the cAMP dependent PII activity depends also on the complementary action of CLS with other unknown sites. A comparison of PII activities in granulosa and small luteal cells underlines a 50 % decrease consecutive to the LH surge. We demonstrated by western-blot that the factor CREB is expressed in granulosa cells as well as in luteal cells. By EMSA we also showed that CREB is able to bind to CLS in both cell types. On the other hand, the SF-1/LRH-1 binding sites NREA and NREB are not functional in follicular cells whereas SF-1 and LRH-1 proteins are expressed. The preservation of CLS functionality in luteal cells suggests that the additional sites play an important role during the post-LH surge down regulation of cyp19 transcription. Lastly, we show that a second mechanism of inhibition of the transcription could imply estradiol. Indeed, estradiol counterbalances the cAMP effect in luteal cells. Western-blot experiments suggest that the steroid probably acts via the β receptor. Our study describes mechanisms that control cyp19 expression in granulosa cells compared to luteal cells.
Abstract FR:
Le pic de LH induit l’ovulation et la lutéinisation en modifiant l’expression de nombreux gènes dont le gène de l’aromatase (cyp19). La chute des trancrits de cyp19 observée in vivo chez le Lapin suite au pic de LH suggère que celui-ci pourrait moduler l’activité du promoteur ovarien (PII) de cyp19 via l’AMPc. Par transfection et mutagenèse dirigée, nous montrons, dans les cellules de granulosa et les cellules lutéales, que l’activation du PII se fait via le site majeur « cAMP responsive element like sequence » (CLS) et via des sites additionnels qui semblent moduler l’action de CLS. Cependant, dans les cellules lutéales, la réponse du PII à l’AMPc est 50% plus faible que dans les cellules de granulosa. L’expression du facteur CREB et sa liaison au site CLS ont été démontrées par western blot et EMSA dans les deux types cellulaires. En revanche, les sites NREA et NREB de fixation pour les facteurs SF-1 et LRH-1 ne sont fonctionnels ni dans les cellules de granulosa, ni dans les cellules lutéales malgré l’expression des facteurs SF-1 et LRH-1. En conséquence CLS, NREA et NREB ne semblent pas impliqués dans la chute de l’aromatase consécutive au pic de LH mais une perte de la fonctionnalité des sites additionnels pourrait être à l’origine de cette chute d’expression. Enfin, nous montrons qu’un deuxième mécanisme d’inhibition de la transcription mettant en jeu l’estradiol, réverse l’action de l’AMPc dans les cellules lutéales via probablement le récepteur β à l’estradiol. Notre étude permet donc d’ébaucher un schéma de régulation du gène de l’aromatase dans les cellules de granulosa comparativement aux cellules lutéales.