Abstract FR:

La methodologie de marquage de photoaffinite utilisant des bases thiosubstituees a ete tres utilisees ces dernieres annees pour etudier les interactions mettant en jeu les acides nucleiques. Dans tous les cas, les marqueurs utilises sont intrinseques et servent a mettre en evidence des interactions tres proches dans l'espace (distance inferieure a 5 a). Ces donnees de proximite permettent alors de construire des modeles de structure tertiaire. Ces structures peuvent etre affinees si la nature du lien covalent utilise comme contrainte est connue. Pour cela, on dispose maintenant de donnees en serie pyrimidine grace a des etudes de reactions modeles. Nous avons contribuer a developper cette methodologie en: 1- etablissant pour la premiere fois la nature d'un photoadduit 4-thiothymidine-adenosine. Ce photoadduit est obtenu dans l'eau avec un rendement de 90% et sa structure cristalline est en accord avec les donnees de rmn et de masse. Sa formation implique une approche antiparallele des deux nucleosides, la liaison c4-s de la 4-thiohymidine reagissant sur la liaison n7-c8 de l'adenosine. 2- synthetisant de nouvelles sondes capables d'explorer un domaine spatial plus vaste que celui couvert par les marqueurs intrinseques. Pour cela la 2'-desoxyuridine a ete substituee en c5 par une chaine de longueur et flexibilite variable, portant a son extremite la 4-thiothymine, puis incorporee par synthese en phase solide dans des oligodesoxynucleotides (odn modifies). Un systeme de double helice adn-odnmodifie ou arn-odnmodifie a permis d'analyser leur comportement. Alors que (dans le meme systeme) la 2'-desoxy-4-thiouridine forme des ponts interbrins uniquement lorsqu'elle est a l'extremite 5', les nouvelles sondes reagissent ainsi quelle que soit la position du marqueur dans la sequence. De plus, au moins pour une sonde courte et flexible, on peut predire convenablement les sites de pontage par modelisation moleculaire. Par ailleurs ces nouvelles sondes ont ete utilisees pour preciser la structure d'un domaine ribozymique en tete de marteau. Les donnees experimentales ont confirme l'existence d'une grande flexibilite conformationnelle et sont en accords avec les donnees structurales obtenues a ce jour. Comparees a la 2'-desoxy-4-thiouridine, elles revelent de nouvelles zones d'interactions