Etude fonctionnelle du facteur de transcription/réparation TFIIH : rôles dans le mécanisme de réparation de l'ADN par excision de nucléotides
Institution:
Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008)Disciplines:
Directors:
Abstract EN:
TFIIH is a multiprotein complex involved in transcription of class II and class I genes, and in nucleotide excision repair (NER). The cellular importance of this complex is illustrated by genetic disorders associated with mutations in two subunits of TFIIH, the XPB and XPD helicases. Those helicases are essentials for transcriptional and DNA repair mechanisms. During my PhD studies, we became interested in the function of TFIIH in NER. We studied the molecular consequences of an XPB mutation which change the last 40 C-terminal amino acids. Mutation disrupts TFIIH activity both in transcription and in repair. This mutant allowed us to identify an XPB phosphorylation site required for the cellular functions of TFIIH. Moreover, we isolated a complex containing TFIIH, RNA polymerase I and two repair proteins XPG and CSB. This complex is involved in ribosomal RNA synthesis. We show that mutations within the CSB protein destabilized the complex. This is also true for mutations within XPB and XPD, arguing for the biological significance of this complex. Finally, in order to study the regulation of TFIIH expression, we study the organisation of murine gene coding for p62 subunit as well as its promoter.
Abstract FR:
TFIIH est un facteur multiprotéique impliqué dans la transcription des gènes de classe II, de classe I et dans la réparation de l'ADN par excision de nucléotides (NER). L'importance de ce complexe au niveau cellulaire est illustrée par l'existence de maladies génétiques associées à des mutations dans deux de ces sous-unités, les hélicases XPB et XPD. Ces dernières sont essentielles aux mécanismes de transcription et de réparation NER. Au cours de mon travail de thèse, nous nous sommes intéressés à la fonction de TFIIH au sein du mécanisme de NER. Nous avons ainsi étudié les conséquences moléculaires d'une mutation portée par l'hélicase XPB qui entraine un changement des 40 derniers acides aminés dans sa séquence primaire en C-terminal. Cette mutation perturbe les fonctions de TFIIH à la fois en transcription et en réparation. L'analyse de ce mutant nous a permis d'identifier un site de phosphorylation au sein de XPB nécessaire pour les rôles joués par TFIIH. Par ailleurs, nous avons identifié un complexe contenant TFIIH, l'ARN polymérase I et deux protéines de réparation XPG et CSB. Ce complexe est impliqué dans la synthèse des ARN ribosomiques. Nous avons montré que des mutations dans la protéine CSB déstabilisaient ce complexe. C'est également le cas avec des mutations portées par les hélicases XPB et XPD confirmant la réalité biologique de ce complexe. Enfin, l'étude de la régulation de l'expression de TFIIH nous a amener à étudier l'organisation du promoteur et du gène murin codant pour la sous-unité p62.