Conditionnement par les récepteurs couplés aux protéines G : mise au point d'un modèle in vitro
Institution:
CaenDisciplines:
Directors:
Abstract EN:
Cardiac ischemic diseases are a major cause of death worldwide. However, cellular mechanisms leading to ischemia / reperfusion lesions remain unclear. In order to study the signaling pathways involved in those processes, we set up an experimental protocol to reproduce in vitro these lesions on an immortalized mice cardiomyocytes cell line (HL-1). When these cells are incubated in a controlled atmosphere containing 0,1% dioxygen, hypoxic lesions can be measured but not reoxygenation lesions. Cell death was mainly due to necrosis induction, with only minor contribution of apoptosis. Mitochondria are known to play a key role in the development of hypoxic lesions, we studied mitochondrial functions using different tools, and evidenced a decrease of mitochondrial membrane potential, a significant increase of reactive oxygen species production and a decrease of the respiratory chain activity following hypoxia. Once this cellular model validated for studying hypoxic lesions, we analysed the expression of opioid receptors (OR) in HL-1 cell line in order to study the implication of these receptors in cardioprotection. Taken together, our results clearly show that OR can not be found in HL-1 cells, or at a too low level to be pertinent for our cardioprotection study ; we should by then have to use transfection protocols to overexpress receptors of interest.
Abstract FR:
Les pathologies ischémiques cardiaques constituent une véritable problématique de santé publique. Cependant, les mécanismes conduisant au développement des lésions d’ischémie/reperfusion sont encore mal connus. Afin de caractériser les voies cellulaires mises en jeu, nous avons mis en place un protocole expérimental permettant de reproduire in vitro ces lésions sur une lignée de cardiomyocytes immortalisés de souris, la lignée HL-1. Nous avons mis en évidence l’existence de lésions d’hypoxie sans lésions de réoxygénation lorsque ces cellules sont placées dans une atmosphère contenant 0,1% de dioxygène ; la mort cellulaire observée est majoritairement liée à l’induction de la nécrose, sans rôle prédominant de l’apoptose. La mitochondrie jouant un rôle crucial dans le développement des lésions d’hypoxie, nous avons étudié les fonctions mitochondriales et avons montré une réduction du potentiel de membrane mitochondrial et une augmentation de la production de radicaux libres au décours de l’hypoxie, ainsi qu’une diminution de l’activité de la chaîne respiratoire mitochondriale. Une fois le modèle cellulaire validé pour l’étude des lésions hypoxiques, nous avons recherché l’expression des récepteurs opioïdes (RO) dans la lignée HL-1 afin d’étudier l’implication de ces récepteurs dans la cardioprotection. Au vu de nos résultats, nous pouvons conclure que ces cellules n’expriment pas, ou trop peu, de RO ; nous devrons donc recourir à des techniques de transfection afin de surexprimer les récepteurs d’intérêt