Apport de nouvelles phases stationnaires dans le contrôle qualité des peptides à visée thérapeutique
Institution:
Paris 11Disciplines:
Directors:
Abstract EN:
The production of “peptide-drug” and recombinant proteins is growing in the pharmaceutical industry. The solid phase synthesis of peptides leads to the formation of related substances of similar structure of the target peptide, hence the need for rigorous quality control. Regarding the recombinant proteins, their quality control is generally performed by peptide mapping, which corresponds to the analysis of peptide fragments resulted from the enzymatic digestion of the protein. For the detection of related substances or degradation products of peptides, analytical methods able to distinguish similar structurally products should be proposed for quality control at all stages of product development. Reversed phase high-performance liquid chromatography (HPLC-RP) is the most common method used either for determining the purity of synthetic peptides or for the peptide mapping of a protein. The aim of this thesis was to evaluate the contribution of new stationary phases in peptide analysis. Different types of particulate or monolithic stationary phases were studied: mixed, hydrophilic interaction and ion-exchange phases. Peptides of different physico-chemical properties or of closed structure (enkephalins) have been studied. Application to the separation of a target peptide (dalargin) from its synthetic impurities has been performed.
Abstract FR:
La production de « peptides-médicaments » et de protéines recombinantes est en plein essor dans l’industrie pharmaceutique. La synthèse des peptides en phase solide conduit à la formation de substances apparentées de structure proche du peptide d’intérêt, d’où la nécessité d’un contrôle qualité rigoureux. En ce qui concerne les protéines recombinantes, leur contrôle qualité est généralement effectué par l’établissement d’une carte peptidique, qui correspond à l’analyse des fragments peptidiques issus de la digestion enzymatique de la protéine à l’aide d’une méthode séparative. Pour la détection des substances apparentées ou issues de la dégradation des peptides, des méthodes analytiques capables de distinguer des formes structurellement très proches doivent être proposées pour le contrôle qualité, à toutes les étapes du développement du produit. La chromatographie liquide haute performance (CLHP) en phase inverse est la méthode la plus utilisée pour la détermination de la pureté des peptides synthétiques ou l’établissement de la carte peptidique d’une protéine. Le but de ce travail de thèse était d’évaluer l’apport de nouvelles phases stationnaires dans l’analyse des peptides. Différents types de phases stationnaires particulaires ou monolithiques ont été étudiés : phases mixtes, d’interactions hydrophiles et d’échange d’ions. Des peptides de caractère physicochimique différents ou de structure proche (les enképhalines) ont été étudiés. L’application à la séparation d’un peptide d’intérêt (dalargine) de ses impuretés de synthèse a été réalisée.