Spectres mutationnels expérimentaux du gène suppresseur de tumeurs TP53 induits par l'acétaldéhyde et l'aflatoxine B1 : utilisation d'un test fonctionnel chez la levure, le FASAY (fuctional analysis of separated alleles in yeast)
Institution:
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Abstract EN:
The main goal of this work was to study mutagenic properties of acetaldehyde, the first metabolite of ethanol, on tumour suppressor gene TP53, in order to explain some mechanisms of carcinogenicity of alcohol. We used a functional assay in yeast, the FASAY, which allow us to establish mutational spectrums in vitro. These spectrum were then compared to those found in oesophagus tumours which show about 80% of TP53 mutations. In order to validate our method, we used as a positive control aflatoxin B1, a strong carcinogenic compound whose mutagenic spectrums on TP53 are documented. After this validation step, we then established mutational spectrum of acetaldehyde. This spectrum was closed to those of oesophagus squamous carcinoma, showing many transitions located on CpG sequences. These results strongly suggest that mutagenic properties of acetaldehyde were linked to inter-strand crosslink adducts. So G>A transitions, classically ascribed to spontaneous deamination of 5-methylcytosine, could also be ascribed to acetaldehyde adducts in alcohol related tumours. These results are in accordance with recent IARC report which concluded that ethanol itself is carcinogenic in humans. Finally, we bring new insight in mechanisms of ethanol carcinogenicity.
Abstract FR:
L’objectif principal de ce travail était d’étudier le pouvoir mutagène de l’acétaldéhyde sur le gène suppresseur de tumeur TP53, dans le but de préciser le mécanisme d’action cancérogène de l’alcool dont l’acétaldéhyde est le premier métabolite. Dans ce cadre, il a été nécessaire de mettre en place un test fonctionnel chez la levure, le FASAY, test permettant de réaliser des spectres mutationnels in vitro. Dans un deuxième temps, les résultats obtenus ont été comparés aux spectres de tumeurs humaines de l’œsophage dans lesquelles TP53 est retrouvé muté dans près de 80 % des cas. La validation d’une telle technique nécessitait d’avoir recours à l’utilisation d’un témoin positif. Nous avons choisi l’aflatoxine B1, mycotoxine reconnue comme un cancérogène puissant et dont les spectres mutationnels sur TP53 sont documentés. Une fois validée, la méthode a servi à évaluer les effets de l’acétaldéhyde. Le spectre mutationnel obtenu avec l’acétaldéhyde, très semblable à celui des cancers épidermoïdes de l’œsophage, a révélé une très forte proportion de transitions G>A localisées de manière préférentielle sur des sites CpG. Les résultats obtenus suggèrent fortement que l’acétaldéhyde exerce un effet mutagène par l’intermédiaire des adduits inter-brins. Les transitions G>A dans les sites CpG étaient jusqu’ici reliées à la déamination spontanée de la 5-méthylcytosine. Elles pourraient donc également être attribuées aux adduits inter-brins de l’acétaldéhyde dans les tumeurs liées à la consommation d’alcool. Ces travaux appuient la conclusion de la récente réévaluation du CIRC qui a conclu à la cancérogénicité de l’éthanol chez l’homme et apportent un éclairage sur les mécanismes en jeu.