Abstract FR:

La préparation des échantillons est devenue une étape essentielle dans l'étude des protéines par RMN. A travers trois exemples, nous mettons l'accent sur les problèmes rencontrés lors de la purification de protéines, et lors de leur expression dans des systèmes bactériens. L'étude par RMN homonucléaire de la calmoduline montre que celle-ci est fortement structurée en hélices. Le faible transfert par couplage scalaire ainsi que l'extrême densité de pics de corrélation dans les spectres noesy rend l'attribution périlleuse. Afin de clarifier ces spectres, nous développons une méthode qui permet de séparer les pics de corrélation dans les cartes noesy. La protéine l20, exprimée dans une souche bactérienne, est produite sous forme de corps d'inclusion dans le cytoplasme. Sa purification nécessite l'utilisation de conditions dénaturantes. Le spectre noesy de la protéine obtenue après dialyse extensive, montre que celle-ci est partiellement repliée autour d'un noyau hydrophobe. La protéine se dénature lentement dans l'échantillon au cours des expériences, ce qui empêche une étude plus poussée de ce repliement partiel. L'étude par RMN homonucléaire du facteur d'initiation 3 d'e. Coli (if3) montre l'existence de deux domaines dans la protéine, relies par un peptide très charge et vulnérable aux enzymes protéolytiques. Le domaine n-terminal conserve une structure propre au sein d'if3. Les expériences hétéronucléaires 3d réalisées sur un échantillon de la protéine complète marquée à l'isotope 15 de l'azote, permettent l'attribution de quelques résidus. Malheureusement, l'information de couplage contenue dans les spectres tocsy est insuffisante pour mener à bien une attribution complète d'if3.