Caractérisation fonctionnelle de l’interaction entre le facteur intermédiaire de transcription TIF1β et les protéines de l’hétérochromatine HP1
Institution:
Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008)Disciplines:
Directors:
Abstract EN:
To define the functional relevance of the interaction between TIF1b and HP1 proteins, we have generated cellular and mouse models carrying point mutations that selectively abrogates the HP1-binding activity of TIF1b (designated TIF1b HP1box). We demonstrate that TIF1b-HP1 interaction is not required for differentiation of F9 cells into primitive endoderm cells but is essential for further differentiation of F9 cells into parietal endoderm cells. Characterization of the knock-in mouse line revealed that the TIF1bHP1box mutation is embryonic lethal and therefore demonstrates that the HP1-binding domain of TIF1b plays a critical role during mouse development. Moreover, TIF1b relocates from eu- to heterochromatin between 7. 5dpc and 8. 5dpc, the stage at which the first developmental defects in the TIF1bHP1box/HP1box embryos are observed. Altogether, these results demonstrate that TIF1b has a dynamic localization and that the PxVxL motif, essential for pericentromeric heterochromatin association, is required for developmental functions of TIF1b. Nevertheless, the integrity of this motif is not required for all of the TIF1b functions. Indeed in the Sertoli cell, the TIF1bHP1box mutation induces the lost of the pericentromeric heterochromatin association but does not lead to any phenotype, in contrast to the null-mutation that lead to testis degeneration. Collectively, these results demonstrate that TIF1b expression in the Sertoli cell is required for normal spermatogenesis and provide the first in vivo evidence for a crucial role of TIF1b that does not require heterochromatin association.
Abstract FR:
Mon travail de thèse a consisté à déterminer les fonctions de l’interaction entre TIF1b et les protéines HP1. Pour cela, nous avons étudié dans des modèles cellulaires et animaux les conséquences de l’introduction de deux mutations ponctuelles dans le motif PxVxL de TIF1b abolissant l’interaction avec les protéines HP1 (mutation TIF1bHP1box). Les cellules F9 TIF1bHP1box/- se différencient normalement en endoderme primitif mais sont incapables de poursuivre leur différenciation en endoderme pariétal. Par ailleurs, la mutation TIF1bHP1box dans la souris conduit à une létalité embryonnaire précoce. L’étude de la localisation sub-nucléaire de TIF1b révèle une relocalisation de l’eu- vers l’hétérochromatine entre 7,5jpc et 8,5jpc au moment où les premiers défauts de développement apparaissent dans les embryons TIF1bHP1box/HP1box. Ces résultats démontrent une compartimentation nucléaire dynamique de TIF1b et montre que l’intégrité du motif PxVxL, indispensable à l’association de TIF1b à l’hétérochromatine péricentromérique, est essentiel pour les fonctions de TIF1b. Néanmoins, il apparaît que ce motif n’est nécessaire que pour une partie des fonctions exercées par TIF1b. Dans la cellule de Sertoli, la mutation TIF1bHP1box entraîne la perte de l’association de TIF1b à l’hétérochromatine péricentromérique mais ne conduit à aucun phénotype alors que les souris porteuses de la mutation nulle présentent un phénotype de dégénérescence testiculaire progressive. Ces résultats démontrent que TIF1b est nécessaire aux fonctions de la cellule de Sertoli et mettent en évidence un rôle crucial de TIF1b in vivo qui ne nécessite pas son association à l’hétérochromatine péricentromérique.