Etudes structurales du recepteur de la Pyoverdine FpvA de Pseudomonas aeruginosa
Institution:
Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008)Disciplines:
Directors:
Abstract EN:
Structural Studies of the Pyoverdin Receptor FpvA from Pseudomonas aeruginosa. Pseudomonas aeruginosa is a gram negative bacteria involved in 10 to 20 % of hospitals infections. Its main targets are burnt and immuno-deficient patients, and people who have developped a cystic fibrosis disease. Its major iron acquisition system also involved in its infectious capacity, is based upon the pyoverdin PaA and its outer membrane receptor FpvA, a TonB dependant receptor. This thesis work intend to better understand the highly specific interactions between the pyoverdin and FpvA. In the first part, we studied many sequences of TonB-dependant receptors available in data banks, in order to identify importants regions of the proteins. The Förster resonnance energy transfer (FRET) abilities between the receptor and its ligand are also presented. In the second part, we used the time-resolved fluorescence spectroscopy technique to study the receptor-ligand interactions of the different FpvA-PaA in vivo and in vitro made complexes. The aim of this work is to understand how the bacteria makes a difference between all these complexes and translocates only the PaA-Iron one. In the third part, we established an efficient and fast process for the FpvA purification from the homologous over expression system in Pseudomonas aeruginosa. We started the 3D crystallogenesis experiments in order to resolve the 3D structure of the FpvA-PaA in vivo made complex. We obtained crystals diffracting at up to 2. 7 A at low temperature.
Abstract FR:
Etudes Structurales du Recepteur de la Pyoverdine FpvA de Pseudomonas aeruginosa. Pseudomonas aeruginosa est une bactérie pathogène impliquée dans 10 à 20 % des infections nosocomiales. Ses cibles privilégiées sont les malades immuno-déficients, ceux atteints de mucoviscidose et les grands brûlés. L'un de ses deux principaux systèmes d'incorporation du fer, qui est en partie responsable dans son grand pouvoir infectieux est basé sur la pyoverdine PaA et son récepteur de membrane externe FpvA, un récepteur TonB-dépendant. Ce travail s'est attaché à mieux comprendre les interactions hautement spécifiques entre la pyoverdine et FpvA. Dans une première partie, une étude des séquences de nombreux récepteurs TonB dépendants disponibles dans les banques de données a été réalisée, afin de mieux caractériser le récepteur FpvA. Les possibilités de transfert d'énergie de résonance de Förster (FRET) entre le récepteur et son ligand sont également présentées. Dans une deuxième partie, les interactions récepteur-ligand dans les différents complexes formés in vivo et in vitro du couple pyoverdine-FpvA sont étudiés par la technique de fluorescence résolue dans le temps, afin de mieux comprendre les moyens qu'utilise la bactérie pour différencier ces complexes et internaliser celui dont elle a besoin. Dans une troisième partie, un protocole rapide et efficace de purification à partir de la surexpression homologue de FpvA est présenté. Les expériences de cristallogenèse tridimensionnelles réalisées à la suite aboutissent à plusieurs formes cristallines dont les plus performantes montrent une diffraction jusqu'à 2,7 Å à basse température.