Abstract FR:

L'enzyme malate deshydrogenase (hl-mdh) de la bacterie halophile extreme haloarcula marismortui, a ete sequencee dans sa partie n-terminale pour pouvoir synthetiser une sonde oligonucleotidique homologue du gene, permettant de cribler une banque genomique de la bacterie sus-citee. Un clone s'hybridant avec la sonde a ete isole de la banque, et la partie codante du gene de la hl-mdh a ete sequencee. La sequence en acides amines a montre des homologies plus importantes avec les lactates deshydrogenases (l-ldh) qu'avec les malates deshydrogenases de differentes sources, et apporte des lumieres interessantes sur l'evolution de cette famille d'enzymes. L'enzyme active est maintenant consideree comme un tetramere. Le modele de stabilisation de la hl-mdh propose anterieurement, dans lequel differents mecanismes de stabilisation dominent suivant la nature du solvant est confirme. Dans un milieu proche des conditions physiologiques, de fortes interactions entre la proteine et les molecules d'eau et de sel du solvant peuvent expliquer la stabilite observee. Le gene a ete clone dans un vecteur d'expression et sur-exprime dans la bacterie e. Coli. La proteine produite sous forme soluble a ete purifiee, caracterisee et montre une etonnante facilite a etre reactivee, indiquant un etat partiellement folded dans la cellule malgre la faible concentration en sel. Le gene de l'enzyme a ete la base de mutagenese dirigee qui a permis de creer une enzyme capable d'utiliser le pyruvate comme substrat en plus de l'oxaloacetate, et fait apparaitre une activite enzymatique ldh en plus de l'activite mdh