Etude de la régulation du point de contrôle du fuseau et de l'attachement kinétochore - microtubule par Rod, sous-unité du complexe RZZ
Institution:
Paris 7Disciplines:
Directors:
Abstract EN:
To maintain genome stability, the genetic material must be distributed equally between the two daughter celés during mitosis. The correct separation of sister chromatids requires that they are bipolarly attached to the microtubules of the spindle before anaphase onset, which is coordinated by the spindle checkpoint; in particular the proteins Mad1/Mad2 and BubR1. The Rod-Zw10-Zwilch complex (RZZ) is a componment of the outer kinetochore involved in both attachment, via the recruitment of Dynein and Mad1, and the checkpoint, via the recruitment of Mad1 and Mad2. Rod protein has a C-terminal domain well conserved but whose function is unknown. The rod z3 mutation is a non¬null point mutation of rod, it is a substitution G1973E located in the C-terminal part of Rod. In this thesis I used video-microscopy of drosophila larval neuroblasts and biochemistry, and I was able to show that the mutation does not disrupt the formation of the RZZ complex but affects its own recruitment to kinetochores and that of Mad1/Mad2. The C-terminal domain of Rod seems therefore to be involved in this activities. Surprisingly, the decrease in Mad2 levels does not affect the checkpoint functioning, as assayed in colchicin. On the other hand, many lagging anaphase chromosomes, some due to merotelic attachments, are observed in the rod z3 mutant celés. Thus the rod z3 mutation is affecting the ability of kinetochores to properly attached microtubules I discuss several possible explanations for this phenotype including the possibility that the mutation has a dominant effect on dynein function. I offer hypothesis based on presumed-functions of Dynein, Mad1 and RZZ complex.
Abstract FR:
Pour maintenir la stabilité du génome, le matériel génétique doit être partagé de manière équitable entre les deux cellules filles lors de la mitose. La séparation correcte des chromatides soeurs nécessite qu'elles soient attachées de façon bipolaire aux microtubules du fuseau avant le déclenchement de l'anaphase, ce qui est coordonné par le point de contrôle du fuseau ; en particulier par les protéines Mad1/Mad2 et BubR1. Le complexe Rod-Zw10-Zwilch (RZZ) est un composant du kinétochore externe impliqué à la fois dans l'attachement, via le recrutement de la Dynéine et de Mad1, et dans le point de contrôle, via le recrutement de Mad1 et Mad2. La protéine Rod possède un domaine C-terminal bien conservé mais dont la fonction est inconnue. La mutation rod z3 est une mutation ponctuelle non nulle de rod, il s'agit d'une substitution G1973E située dans la partie C-terminale de Rod. Dans cette thèse, j'ai utilisé la vidéo-microscopie de neuroblastes larvaires de drosophile et la biochimie pour montrer que la mutation ne perturbe pas la formation du complexe RZZ mais affecte son propre recrutement au kinétochore ainsi que celui de Madl/Mad2. Le domaine C-terminal de Rod semble donc impliqué dans ces activités. Etonnement, la diminution du recrutement de Mad2 ne perturbe pas le fonctionnement du point de contrôle, testé en colchicine. Par contre, de nombreux chromosomes retardés en anaphase, dont certains dus à des attachements mérotéliques, sont observés danE les cellules du mutant rod z3. Donc, la mutation rod z3 affecte la capacité des kinétochores à s'attacher correctement aux microtubules. Je discute de plusieurs explications possibles pour ce phénotype, dont la possibilité que la mutation ait un effet dominant sur la fonction de la Dynéine. Je présente des hypothèses basées sur les fonctions supposées de la Dynéine, de Mad1 et du complexe RZZ.