Abstract FR:

La cinétique d'adsorption des protéines sur un immunoadsorbant a été étudiée par une nouvelle méthode chromatographique. La théorie, récemment développée au laboratoire, suppose une loi cinétique du second ordre de type Langmuir. Elle est basée expérimentalement sur la détermination et l'étude de la fraction non retenue d'un soluté injecté sur une colonne chromatographique. Cette théorie a été appliquée à l'étude du processus cinétique d'association d'un antigène sur un anticorps immobilisé. Le système étudié est constitué de l'albumine humaine et de l'anticorps anti-albumine humaine. L’immobilisation de l'anticorps a été préférée à l'immobilisation de l'antigène car cette approche permet d'une part d'étudier sur une même colonne chromatographique l'influence de différents paramètres sur la reconnaissance antigène-anticorps, et d'autre part de consommer très peu d'anticorps. Des colonnes d'anticorps polyclonal ayant des capacités variables ont été préparées. La comparaison des résultats obtenus sur ces colonnes par analyse du dédoublement du pic d'élution et par analyse frontale permet de valider la nouvelle technique chromatographique. L’étude cinétique effectuée à l'aide de la méthode du dédoublement du pic d'élution permet de dissocier le phénomène cinétique d'adsorption dû au transfert de matière à travers le film stagnant de celui caractérisant effectivement l'association. Après avoir étudié l'adsorption de l'albumine sur l'anticorps polyclonal, nous nous sommes intéressés à l'adsorption sur des anticorps monoclonaux. La présence d'une substance qui se lie à l'albumine peut modifier son adsorption sur un anticorps. L’étude cinétique sur des anticorps monoclonaux de spécificité connue permet de mettre en évidence ce phénomène. La méthode est particulièrement bien adaptée à cette étude dans le cas de l'albumine glycosylée.