thesis

Mecanismes de l'electrophorese de l'adn en simple brin sur gels de polyacrylamide et sur gels a matrice mixte

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Jan. 1, 1996

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Ce travail experimental etudie les mecanismes de l'adn en simple brin dans les gels de polyacrylamide et les gels a matrice mixte lors de l'electrophorese. Pour cette etude, nous avons utilise deux appareillages: la birefringence electrique permettant d'observer les changements d'anisotropie du systeme a l'etablissement puis a la coupure du champ electrique et un montage de recouvrement de fluorescence apres photoblanchiment permettant l'observation simultanee des coefficients de dipersion et de la mobilite electrophoretique. Nous avons cherche a montrer qu'un mecanisme de reptation avec elongation du tube similaire a celui observe pour l'adn en double brin dans les gels d'agarose et permettant l'application de l'electrophorese en champs pulses pouvait etre observe. L'etude de l'adn en simple brin a permis de determiner sa longueur de persistance et sa variation en fonction de la force ionique de la solution ainsi que la mobilite electrophoretique en solution de l'adn en simple brin. L'etude dans les gels de polyacrylamide a permis de definir un domaine de reptation des chaines d'adn en simple brin grace aux coefficients de diffusion a champ nul et aux temps de reptation correspondants. L'etude de la mobilite electrophoretique et des coefficients de dispersion a montre que le modele de la reptation incluant les fluctuations decrivait le mieux la migration de l'adn en simple brin dans les gels de sequencage. Le temps court de la relaxation de birefringence a pu etre associe a la perte de suretirement de la chaine a l'interieur du tube. Ce resultat associe a ceux de la mobilite electrophoretique et de la dispersion ont permis de determiner des conditions d'apparition du suretirement de la chaine d'adn en simple brin et permettre des essais de separation par electrophorese en champs pulses