Impact de la délétion de TRRAP ou MSH2 sur le développement des cellules B et la commutation isotypique
Institution:
Toulouse 3Disciplines:
Directors:
Abstract EN:
TRRAP is a common component of histone-acetyltransferase (HAT) complexes. TRRAPalso takes part in MRN complexe, without any HAT activity. TRRAP is implicated in severalprocesses where DNA accessibility is required, such as transcription and DNA repair. Trrapdeletion in mouse results in embryonic lethality. To avoid this lethality, we took advantage ofthe Cre-LoxP system with Cre under the control of CD19 transcriptional regulatory elements;CD19 being only expressed in B cells. Phenotypic and molecular analyses of Trrap-/-/CD19Cre/Cre mice B cells demonstrated thatTRRAP is strongly implicated in B cell development and CSR. Analyses by single cell PCR at eachdevelopmental stage revealed that TRRAP is absolutely required for proliferation; Effects ofTRRAP deletion are more pronounced in proliferating cells than in quiescent cells. My resultsalso suggest that TRRAP plays a central role in cell cycle regulationMSH2 takes part in mismatch repair. Its precise role in CSR is still unknown althoughMSH2 deficiency results in slight reduction of CSR. Currently MSH2 is thought to be implicated indouble strand breaks (DSB) generated outside S regions tandem repeats during CSR. To test this model, I analyzed CSR in MSH2 and Sµ tandem repeats deficient mice. Analysis of those mutants shows a complete CSR abolishment. Neither S region transcription norcell proliferation (both required for CSR) are implicated. It seems likely that a lack of DSB isresponsible for the absence of CSR, despite AID hotspots presence. Besides, my resultsdemonstrate that MSH2 affects Sµ region but also domains outside R-loops.
Abstract FR:
TRRAP est un composant de différents complexes histone-acetyltransférases (HAT). Elle peut également s'associer au complexe MRN dépourvu d'activité HAT. TRRAP est impliquée dans différents processus nécessitant une accessibilité accrue de l'ADN tels que la transcription et la réparation de l'ADN. La délétion du gene Trrap chez la souris est létale aux stades précoces du développement embryonnaire. Nous avons donc recouru a une inactivation conditionnelle, restreinte aux lymphocytes B, en utilisant le système Cre-loxP, ou Cre se trouve sous le contrôle des éléments transcriptionnels de CD19, un marqueur spécifique de la lignée B. L'analyse phénotypique et moléculaire de populations cellulaires B des souris Trrap-/-/CD19Cre/Cre m'a permis de montrer que TRRAP jouait un rôle important dans le développement B et dans la CSR. Une analyse plus poussée au niveau de la cellule unique par" single-cell PCR " à différents stades de développement, a révélé que TRRAP était absolument requise pour la prolifération des cellules B, et que les effets de sa déficience sont plus prononcés dans les cellules proliférantes que quiescentes. Mes résultats suggèrent fortement que TRRAP possède un rôle central et général dans la régulation du cycle cellulaire. La protéine MSH2 est impliquée dans le mécanisme de réparation des mésappariements(mismatch repair). Son rôle précis dans la CSR est encore inconnu, sa déficience provoque une faible diminution de la CSR. Le modèle en vogue stipule qu'elle jouerait un rôle crucial dans les cassures double brin générées en dehors des motifs répétés des régions S. Pour tester ce modèle, j'ai analyse la CSR dans des souris déficientes en MSH2 et en motifs répétés de la region Sµ. L'analyse des souris mutantes a montre que la double déficience abolissait complètement la CSR. Ce blocage n'est pas du a une inhibition de la transcription des régions S ni a un défaut de prolifération (deux pré-requis a la CSR) mais plutôt a l'absence de cassures au niveau de l'ADN malgré la présence de "points chaud" pour AID. Par ailleurs, mes résultats montrent que le domaine d'action de MSH2 dans la region Sµ s'étend bien au-delà des domaines delimités par les boucles R.