Abstract FR:

La paraoxonase humaine (ec 3. 1. 8. 1, pon1) est une metalloenzyme a calcium associee aux lipoproteines plasmatiques de type hdl. Elle est impliquee dans la prevention de l'oxydation des lipoproteines de type ldl. Notre interet pour la pon1 tient a son activite d'hydrolase d'organophosphores (opase). Notre objectif est d'utiliser une forme ingenierisee de cette enzyme dans le traitement de l'intoxication par les ops neurotoxiques de guerre et pour la decontamination. L'optimisation de l'efficacite catalytique de la pon1 implique l'elucidation prealable de son mecanisme catalytique et la determination de sa structure tridimensionnelle. La nature et la concentration du detergent associe a la pon1 purifiee determinent la stabilite et l'activite de l'enzyme. La modification chimique selective d'aminoacides et la mutagenese dirigee ont permis l'identification de residus essentiels aux activites opase et arylesterase (are) de la pon1 humaine. Ces residus sont : c41, c352, h114, h133, h154, h242, h284, e52, e194, d53, d168, d182, d268, d278 et w280. Chez le lapin, les aminoacides h114, h133, h154, e52, d53 et d268 sont essentiels a l'activite are de la pon1, mais d168, e194, h242 et w280 ne le sont pas. Afin d'identifier les ligands du calcium et de sonder son environnement, la liaison du 4 5ca, apres electrophorese en conditions non denaturantes, et du terbium, un analogue fluorescent du calcium, ont ete etudiees. L'etude de substrats suicides a ete envisagee afin d'identifier des residus du centre actif. Des electrophoreses realisees en conditions non denaturantes et des modifications chimiques par pontage avec des reactifs bifonctionnels ont montre que les pon1 de l'homme et du lapin sont dimeriques, actives et homogenes en presence d'une concentration micellaire de triton x-100. La structure quaternaire, l'activite et la stabilite de la pon1 dependent de la nature et de la concentration du detergent ainsi que de la concentration en ions calcium.