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La rubredoxine de Clostridium Pasteurianum : clonage et séquençage du gène, étude transcriptionnelle ; expression chez Escherichia coli

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Jan. 1, 1993

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La rubredoxine est une proteine fer-soufre isolee de bacteries aerobies ou anaerobies. Consideree comme transporteur d'electrons, la rubredoxine des anaerobies a une fonction qui reste a determiner. Sa structure est par contre bien connue. Un fragment bglii/hindiii de 3. 9 kilobases contenant le gene de la rubredoxine de clostridium pasteurianum a ete clone et sequence. En plus du gene de la rubredoxine, ce fragment contient trois phases de lecture ouverte. La sequence de l'une d'elles presente des similitudes avec celle de la thioredoxine reductase de escherichia coli. La sequence traduite du gene de la rubredoxine revele que les positions 14, 22 et 48 sont occupees respectivement par deux asparagines et une glutamine et non par les carboxylates correspondants, comme cela avait ete determine par d'autres auteurs. Ces modifications ont ete confirmees en resequencant la rubredoxine extraite de c. Pasteurianum. Les transcrits de la rubredoxine sont monocistroniques (environ 230 bases). Leur quantite, optimale lors de la phase exponentielle de croissance, depend peu de la source d'azote ou de la concentration en fer du milieu de culture. L'extremite 5 des arn messagers a ete cartographiee. L'expression du gene de la rubredoxine chez e. Coli permet la purification d'environ 4 mg de proteine par litre de culture, soit 100 fois plus que chez c. Pasteurianum. Les proprietes de la rubredoxine recombinante sont identiques a celles de la proteine native excepte la presence chez cette derniere d'un groupement formyle sur la methionine n-terminale