Identification de nouvelles cibles de WT1 au cours de la néphrogenèse précoce et analyses fonctionnelles chez la souris
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Abstract EN:
WT1 encodes a transcription factor and is mutated in a subset of Wilms’ tumors in children. Instead of developing motors, Wt1-/- mouse embryos suffer from renal agenesis due to apoptosis of the tissue, clearly demonstrating the complexity of WT1 functions in vivo. In this study we took an unbiased approach by performing DNA microarray studies on renal tissues isolated from Wt1-/- and Wt1-/- embryos at E10. 25. Three genes with reduced expressions were selected for further studies : Rspondin1, Fgf10, and Fgf20. RSPO1 is a secreted positive modulator of the WNT/β-catenin signalling pathway. In the mouse embryonic kidney Wt1 and Rspo1 expressions highly overlap. The combination of reporter transgenic embryos and in vitro experiments point to a very complex regulation of Rspo1, with evolutionary conserved elements scattered over more than 20kb upstream of the transcription start site. In particular, we isolated a 750bp region driving Rspo1 expression in the mouse neural tissues. Fibroblast growth factors FGF10 and FGF20 are secreted molecules implicated in the lacrimoauriculodentodigital syndrome and Parkinson’s disease, respectively. We have addressed potential roles of FGF10 and FGF20 in the renal phenotype of Wt1-/- embryos. In vitro cultures of wildtype urogenital ridges (UGR) in media supplemented with FGF10/20 led to ectopic production of UBs. Moreover, UGRs from Wt1-/- mice showed a partial rescue of the phenotype by forming a UB. Taken together we have identified novel genes that are under control of WT1 and that may play key roles during kidney development. Future functional analysis will better assess their roles and involvement in the complex phenotype of Wt1-/- mice.
Abstract FR:
WT1, codant pour un facteur de transcription, est muté dans une proportion de tumeurs de Wilms chez l’enfant. Au lieu de développer des tumeurs, les souris Wt1-/- souffrent d’agénésie rénale suite à une apoptose précoce du tissu, démontrant clairement la complexité des fonctions de WT1 in vivo. Au cours de ma thèse, j’ai utilisé la techniques de micropuces à ADN et identifié les gènes dérégulés dans les reins d’embryons Wt1-/- à E10. 25. Trois gènes sous-régulés ont été sélectionnés pour une étude plus approfondie : Rspondin1, Fgf10 et Fgf20. RSPO1 est une protéine secrétée activant la voie canonique WNT/β-catenin. Dans le rein embryonnaire de souris, j’ai pu constater des profils d’expression similaires de Rspo1 et Wt1. La génération d’embryons transgéniques rapporteurs, combinée à des études in vitro ont mis en évidence des éléments de régulation de Rspo1 hautement conservés, s’étendant sur plus de 20kb en amont du site d’initiation de la transcription. En particulier, j’ai pu isoler une région de 750 pb contrôlant l’expression de Rspo1 dans les tissus nerveux. Chez l’homme, les facteurs de croissance FGF10 et FGF20 sont associés au syndrome lacrimoauriculodentodigital et à la maladie de Parkinson respectivement. Des canaux de Wolff (CW) sauvages isolés mis en culture en présence de FGF10 et/ou FGF20 développement des conduits uretéraux (CU) surnuméraires tandis que les CW Wt1-/- présentent une restauration partielle du phénotype en formant des CU. Ainsi, ce travail a permis d’identifier des gènes régulés par WT1 au cours du développement rénal. Des analyses fonctionnelles supplémentaires permettront de spécifier leurs rôles et leurs implications dans le phénotype Wt1-/-.