Etudes des modifications post-traductionnelles de la phosphatase Cdc25C lors de la régulation de la transition G2/M du cycle cellulaire
Institution:
Toulouse 3Disciplines:
Directors:
Abstract EN:
CDC25C phosphatase is a key actor in cell cycle progression that controls the activation of CDK1-cyclin B at mitosis and during the G2/M DNA damage. Its activity is known to be highly regulated by a number of signalling pathway-activated kinases resulting in its phosphorylation on multiple residues. In this study, we have purified CDC25C from cells and have used a proteomic approach to identify new regulatory phosphorylations. Here, we report the identification by mass spectrometry of two phosphorylations on serine 168 and 263, and one méthylation on arginine 35. To conclude we have realized a functional analysis of S168 and S263 phosphorylations. We demonstrate by cell imaging that mutation of S263 to alanine leads to a nuclear accumulation of CDC25C. We propose that phosphorylation at S263 is part of the regulatory mechanism that modulates nuclear import of CDC25C, thus preventing cytoplasm to nucleus shuttling.
Abstract FR:
La phosphatase Cdc25C est un acteur critique de la progression du cycle cellulaire par son rôle jouée dans le contrôle de l'activation du complexe CDK1-Cycline B lors de l'entrée en mitose et de la mise en place des mécanismes de surveillance. Son activité est régulée par de nombreuses kinases impliquées dans les cascades de signalisation cellulaire résultant dans la phosphorylation de nombreux résidus. Au cours de cette étude, nous avons purifié Cdc25C à partir de cellules humaines et réalisé une approche protéomique globale dans le but d'identifier de nouvelles modifications régulatrices. Nous présentons dans ce manuscrit la mise au point des conditions de purification de la phosphatase et les différentes modifications post-traductionnelles que nous avons identifiées par spectrométrie de masse, en particulier deux phosphorylations sur les résidus S168 et S263 et une méthylation sur le résidu R35. Pour terminer nous avons réalisé une analyse fonctionnelle des phosphorylations sur les S168 et S263. Nous avons montré par imagerie cellulaire que la mutation de la S263 en alanine conduisait à l'accumulation nucléaire de Cdc25C. Nous proposons ainsi que la phosphorylation de la S263 soit impliquée dans un mécanisme de régulation qui module l'import nucléaire de Cdc25C.