Purification, caractérisation structurale et fonctionnelle d'une protéine, BnD22, induite par la contrainte hydrique progressive chez le colza
Institution:
Paris 12Disciplines:
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La bnd22 est une proteine induite au cours d'une contrainte hydrique progressive chez le colza. Cette proteine s'accumule fortement dans les jeunes feuilles de la plante au stade rosette. La synthese et l'accumulation de la bnd22 dans ces feuilles sont correlees avec la tolerance de celles-ci a la contrainte hydrique, caracterisee par le maintien du contenu relatif en eau, le maintien de la teneur en proteines solubles et l'inhibition de l'activite proteolytique foliaire endogene. Ces resultats constituent un argument en faveur d'une activite potentielle d'inhibiteur de proteases chez la bnd22, suggeree par des travaux anterieurs sur la base d'homologies de sequence avec les inhibiteurs de la famille de kunitz. La bnd22 a ete purifiee par chromatographie d'echange d'anions et par chromatographie en phase inverse. Elle a ete caracterisee sur le plan structural et une activite inhibitrice de proteases a ete recherchee. Elle presente une masse, mesuree par spectrometrie de masse, d'environ 19 kda. Sa structure secondaire, determinee par dichroisme circulaire et predite d'apres sa sequence en acides amines, est composee aux deux tiers de structure non periodique ainsi que d'un tiers de feuillet beta, analogue a celle de certains inhibiteurs de la famille de kunitz. Les mesures d'activite proteolytiques en presence de bnd22, effectuees sur les proteases endogenes foliaires ainsi que sur quatre proteases exogenes d'origines differentes, n'ont pas permis de mettre en evidence une inhibition significative