Découverte de nouveaux gènes cibles potentiels dans le génome humain pour les PPAR dans le domaine des interactions cellulaires
Institution:
Nancy 1Disciplines:
Directors:
Abstract EN:
New PPAR (Peoxisome Proliferator-Activated Receptors) target genes have been searched using two complementary protocols : immunoselection of human genomic DNA fragments that specifically bind PPARs and microarray. The first experimental approach has allowed the identification of a PPAR binding sequence located upstream the (HSA)SEMA6B gene. The latter encodes the semaphoring 6B, a protein involved in axonal interactions (Genomics, 2004, 83 : 1141-1150). From 13 human tumoral cell lines, we selected the MCF-7 breast adenocarcinoma, HepG2 hepatoblastoma and T98-G glioblastoma cell lines to study the impact of PPAR agonists, alone or in combination with the 9-cis-retinoic acid (a RXR agonist), on the expression of the (HSA)SEMA6B gene. A down regulation of this expression was noted whatever the activated PPAR isotype and the cell line investigated (Int. J. Oncol, 2006, 28:977-984). The repression has been observed at the transcriptional and translational levels. The latter was examined using an anti-semaphorin 6B polyclonal antibody that we have produced and characterized. On the other hand, an up-regulation of the (HSA)SEMA6B gene expression was obtained when the three cell lines were treated with thyroxin. Microarray analyses confirmed the down-regulation of the PPAR-induced (HSA)SEMA6B) gene expression. They revealed that thed expression of some genes involved in cellular interactions is modulated by PPARalpha and PPARß/delta.
Abstract FR:
De nouveaux gènes cibles pour les récepteurs activés par les proliférateurs (PPAR) ont été recherchés en mettant en œuvre deux technologies complémentaires : l'immunosélection de fragments (ISF) d'ADN génomique humain capables de fixer spécifiquement les PPAR sur leurs éléments de réponse et la recherche par puce à ADN. La première approche a permis d'identifier un PPRE potentiel en amont du gène (HSA)SEMA6B codant la sémaphorine 6B qui intervient dans la reconnaissance des axones (Genomics, 2004, 83 : 1141-1150). A partir de 13 lignées, nous avons sélectionné les cellules MCF-7 (originaires d'un adénocarcinome mammaire), HepG2 (issues d'un hépatoblastome) et T98-G (provenant d'un glioblastome) qui expriment à un taux élevé la sémaphorine 6B, pour étudier la régulation de son expression. Nous montré que les agonistes des PPAR régulent négativement l'expression du gène (HSA)SEMA6B) de concert avec l'acide 9-cis-rétinoïque, ligand de RXR (Int. J. Oncol, 2006, 28:977-984). Cette inhibition a été appréhendée au niveau des ARNm par RT-PCR semi-quantitative et/ou à temps réel, et au niveau de la protéine par immunoréplique grâce à un anticorps anti-sémaphorine 6B que nous avons produit et caractérisé. Une régulation positive de l'expression de ce gène par la thyroxine a été constatée. La deuxième approche mettant en œuvre la technique des puces à ADN a permis de confirmer les résultats obtenus pour cette sémaphorine. Elle a fourni des résultats intéressants, pour les cellules MCF-7 et T98-G, concernant la modulation par les agonistes de PPARalpha et de PPARß/delta de l'expression de plusieurs gènes intervenant dans la reconnaissance, l'adhésion et la migration cellulaires.