Etude de la fonction de la sous-unité d'intégrine α6 dans les cellules de peau
Institution:
Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008)Disciplines:
Directors:
Abstract EN:
Integrins are major receptors for the extracellular matrix. α6-/- mice die at birth with a severe skin blistering, due to a total absence of hemidesmosomes in mutant cells. To further study the function of α6 in the skin, we generated conditionally immortalized cell lines from the epidermis of α6+/- and α6-/- mouse embryos. Mutant cells present a decreased adhesion on laminin 5, the major component of the basement membrane in the skin, and on laminin 10/11 and 2. A DNA array analysis revealed alteration in the expression of different families of genes, such as extracellular matrix components (laminin 5), membrane receptors (β4 integrin or collagen XVII) or signalling molecules (TGFβ family of proteins). An increase of several epidermal differentiation markers is observed in mutant tissues. Our hypothesis is that this may be linked to an up-regulation of the TGFβ/Jun/Fos pathway in α6-/- keratinocytes. We finally studied the function of the cytoplasmic tail of α6 by analysing the behaviour of our α6-/- keratinocytes transfected with either the α6A or the α6B isoform. Results revealed that β4 integrin accumulates in the endoplasmic reticulum where it colocalizes with calnexin when α6 is missing, while it is translocated at the plasma membrane in presence of either α6A or α6B. Adherence properties of mutant cells transfected with α6B are however still altered.
Abstract FR:
Les intégrines sont les principaux récepteurs de la matrice extracellulaire. Les souris α6-/- meurent à la naissance et présentent un décollement généralisé de l'épiderme, dû à une absence d'hémidesmosomes dans les tissus mutants. Afin d'analyser plus précisément la fonction d'α6 dans la peau, nous avons généré des lignées de kératinocytes immortalisés de manière conditionnelle, à partir d'embryons de souris α6+/- et α6-/-. Les cellules mutantes adhèrent moins bien sur laminine 5, le composant majeur de la lame basale dans la peau, et sur les laminines 10/11 et 2. Des expériences de puces à ADN ont révélé que l'expression de différentes familles de gènes est modifiée dans les cellules mutantes : protéines de la matrice extracellulaire (laminine 5), molécules d'adhérence (intégrine β4 ou collagène XVII), ou des voies de signalisation (les protéines de la famille TGFβ. Nous avons également observé une augmentation de l'expression des marqueurs de la différentiation épidermique dans les tissus mutants. Notre hypothèse est que ces altérations pourraient être liées à une surexpression de la voie TGFβ/Jun/Fos dans les kératinocytes α6-/-. Nous avons enfin réalisé une étude structure/fonction d'α6. Pour cela nous avons transfecté de manière stable les lignées de kératinocytes mutants avec les isoformes α6A et α6B. L'analyse de nos lignées cellulaires a révélé que la sous-unité d'intégrine β4 s'accumule dans le réticulum endoplasmique où elle colocalise avec la calnexine lorsque son partenaire α6 est absent, alors qu'elle est transportée à la membrane plasmique d' α6A mais aussi' α6B. Les propriétés d'adhérence des cellules transfectées par α6B sont cependant altérées sur les substrats de laminine testés précédemment.