Abstract FR:

L'objectif de cette thèse réside dans l'étude du convoyage du cu(I) à l'intérieur de l'appareil de golgi dans la levure saccharomyces cerevisiae. La métallo-chaperonne ATX1 séquestre le cu(I) cytosolique puis le transfère à l'extremité N-terminale de l'atpase CCC2, localisée dans les membranes du golgi. Ce domaine N- terminal est constitué de deux domaines de liaison aux métaux lourds, dénommés M1 et M2, qui sont homologues à ATX1. Des tests de complémentation dans une souche ATX1 ont montré que des protéines analogues à ATX1, de par un repliement βαββαβ et la présence d'un motif de liaison aux métaux lourds CXXC (M1 et M2 produit en protéines solubles par exemple) pouvaient se substituer à ATX1. Afin d'améliorer la sensibilité du test phénotypique, un nouveau vecteur d'expression a été créé qui permet l'expression de CCC2 en infime quantité. En utilisant ce nouveau système d'expression, des tests de complémentation ont été réalisés dans une soucheATX1 CCC2. La co-expression d'ATX1 (ou d'un homologue) avec des protéines CCC2 modifiées sur leur extrémité n- terminale a permis de caractériser in vivo le mécanisme de transfert du cu(I) entre les deux protéines partenaires. Ainsi, ATX1 et certains homologues délivrent le cu(I) indifféremment à M1 ou à M2 de CCC2. Néanmoins, les homologues sont moins efficaces qu' ATX1. Cette différence de fonctionnalité semble dépendre de la flexibilite de la boucle de liaison au métal des homologues, ainsi que de leurs surfaces de potentiel électrostatique. Le cuivre lié sur l'extrémité N-terminale de l'atpase est ensuite transféré à un site de liaison qui reste à définir, localisé potentiellement sur la grande boucle cytoplasmique.