Abstract FR:

Les secretions salivaires et amphidiales des nematodes phytoparasites sedentaires meloidogyne spp. Et globodera spp. Semblent jouer un role preponderant au cours des differentes phases de parasitisme. Ces nematodes induisent dans les tissus vasculaires de plantes hotes la differenciation de cellules nourricieres polynucleees, au metabolisme tres actif, qui fournissent au pathogene les aliments necessaires a son developpement. Afin de mieux comprendre les mecanismes moleculaires de l'interaction plante/nematode, on envisage l'expression en plante d'anticorps capables, par simple fixation, de bloquer l'activite de ces secretions. Les scfv (anticorps simple-chaines) constituent des outils de choix pour ce type d'etude car ils representent la structure minimale capable de mimer le site de fixation a l'antigene d'un anticorps, et peuvent etre exprimes sous forme active a des taux importants en cellule vegetale. A partir d'anticorps monoclonaux diriges contre les secretions amphidiales et salivaires de nematodes, trois scfv diriges contre g. Rostochiensis et deux scfv diriges contre m. Incognita ont ete synthetises. Leur activite a dans un premier temps ete verifiee en tests elisa sur homogenats de nematodes, apres expression en bacterie. La specificite antigenique des scfv diriges contre g. Rostochiensis a pu etre comparee a celle des anticorps monoclonaux correspondants sur western-blots d'homogenat de larves. L'activite de l'un des scfv diriges contre m. Incognita a ete analysee plus avant par differents tests elisa. Ce scfv s'est revele hautement specifique et presente une affinite pour son antigene au moins egale a celle de l'anticorps monoclonal. Dans une seconde etape, la stabilite de ce scfv en cellule vegetale a ete analysee apres expression transitoire en protoplastes. Plusieurs localisations cellulaires ont ete ciblees grace sa fusion a une sequence signal de secretion et/ou a la sequence kdel de retention dans le reticulum. Son taux d'expression a fourni des resultats prometteurs quant a son utilisation pour la transformation de plantes