Abstract FR:

Le but de cette these etait la preparation et l'etude de nouveaux agents de modification chromophoriques de proteines. La premiere partie porte sur la synthese et la caracterisation d'un reactif chromophorique pour cysteines, le chlorure de n-4'-chlorobenzyl-4-chloroacetylpyridinium. Ce compose, par reaction avec la fonction thiol des cysteines, engendre un chromophore qui se comporte comme unsolvatochrome negatif. Ce chromophore peut etre utilise comme sonde pour etudier, grace a ses proprietes spectrales, la polarite et le ph de l'environnement des cysteines modifiees. Ces proprietes ont ete determinees grace a la synthese et a l'etude des composes modeles et a l'etude de ce reactif avec differents enzymes de structure connue tels que la glyceraldehyde-3-phosphate deshydrogenase, l'aldolase et la papaine. Cependant, ce compose ne peut etre utilise pour des etudes quantitatives en raison de la variabilite de son coefficient d'extinction molaire suivant le systeme etudie. Cette observation nous a conduits a mettre au point de nouveaux reactifs de dosage tel que l'iodure de (e)-1-methyl-4(2'-methylsulfonylvinyl)pyridinium (seconde et troisieme partie). Ces composes, par reaction avec la fonction thiol des cysteines, donnent naissance a des bandes d'absorption tres intenses et stables dans le visible qui peuvent etre aisement detectees par spectrophotometrie. Ces modifications spectrales permettent de doser et de reperer les residus modifies. Enfin, les annexes presentent les etudes effectuees pour determiner les proprietes en optique non lineaire de composes tels que l'iodure de (e)-1-methyl-4(2'-methylthiovinyl)pyridinium et de ses derives, ainsi que la synthese d'analogues de substrats chromophoriques de differents enzymes tels que l'acylase, la chymotrypsine et la cysteine lyase