Abstract FR:

Les travaux presentes constituent une contribution a la connaissance des genes pnl/pnl (orf 86), lef-4 (orf 90) et lef-5 (orf 99), qui sont impliques directement ou indirectement dans les mecanismes de regulation de l'expression des genes tardifs et tres tardifs chez acmnpv. L'etude de leur expression d'une part et de la fonction des proteines codees d'autre part, a ete entreprise. Les cinetiques d'expression des transcrits au cours du cycle viral dans les cellules sf21, ainsi que les sites d'initiation et de terminaison de la transcription ont ete determines. Ces donnees transcriptionnelles, cumulees avec une analyse de l'activite des promoteurs en cellules non infectees, nous ont permis de montrer que pnk/pnl etait un gene precoce immediat, alors que lef-4 et lef-5 etaient du type precoce retarde. La suppression du gene pnk/pnl du genome d'acmnpv c6 (knock-out) a permis de montrer que ce gene n'etait pas indispensable pour l'execution du cycle viral. Par ailleurs, l'analyse de populations virales a permis de montrer que ce gene etait absent de certaines souches d'acmnpv et d'autres virus comme bmnpv et opmnpv. L'obtention d'un anticorps dirige contre des peptides internes a lef-4, a permis d'une part, d'etudier la cinetique d'expression de cette proteine, et d'autre part de determiner la localisation sub-cellulaire par des techniques immunologiques couplees a l'observation en microscopie confocale et electronique. Differents systemes d'expression ont ete utilises, afin de produire les proteines en quantite importante. En systeme bacterien, des problemes d'insolubilite ont ete rencontres. En complement, le systeme baculovirus a ete utilise pour l'hyper-production de lef-4 et lef-5. Deux virus recombinants, acoverlef-4 et acoverlef-5 ont ete construits. Le virus acoverlef-4 nous a permis de realiser les premieres experiences concernant la determination des domaines fonctionnels de lef-4.