Abstract FR:

Les viroïdes sont les plus petits agents pathogènes connus (246 à 401 nt). Ce sont des ARN nus, simple-brin, circulaires et non-codants dont les deux séquences complémentaires nommées (+) et (-) co-existent dans les cellules. Il existe deux familles : les Pospiviroidae et les Avsunviroidae. Ces derniers ont dans la séquence de chaque polarité un ribozyme en tête de marteau, indispensable à leur réplication ARN dépendante. À ce jour, tous les viroïdes ont été identifiés chez des végétaux supérieurs. Le premier objectif de ma thèse a été de tester la réplication d’un Avsunviroidae, le viroïde Avocado sunblotch (ASBVd), dans un système modèle non-photosynthétique, la levure Saccharomyces cerevisiae. J’ai démontré que l’ASBVd est capable de se répliquer et de se maintenir pendant au moins 25 générations dans la levure. De plus, l’ASBVd est sensible à la dégradation des ARN nucléaire et cytoplasmique de S. Cerevisiae. Les interactions des viroïdes avec les facteurs cellulaires semblent intimement liés à leurs caractéristiques structurales et catalytiques. Un très haut degré de complémentarité entre les différentes régions de ces ARN leur permet d’adopter des structures complexes. Le deuxième objectif de ma thèse a été d’étudier le comportement cinétique et structural des brins (+) et (-). J’ai mis en évidence des différences de propriétés biophysiques entre les deux brins et une plus grande efficacité d’auto-clivage de l’ASBVd (-). La structure de l’ASBVd est déterminée par une technique biochimique innovante et haut débit, le SHAPE (sélective 2’-hydroxyl acylation analysed by primer extension), pour préciser et localiser les différences structurales dans deux polarités