Purification and Characterisation of a Fungal Alkaline Phosphatase from an Arbuscular Mycorrhiza
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Les champignons mycorhizogènes à arbuscules forment des associations mutualistes, appelées mycorhizes a arbuscules, avec les racines de la plupart des familles de plantes terrestres et ont une influence majeure sur l'amélioration de la croissance, de la diversité et de la sante des plantes. La mycorhization améliore l'acquisition des nutriments minéraux du sol par la plante via le champignon, et en retour, le champignon obtient du carbone organique via la plante. Cependant, étant donnée l'impossibilité de cultiver les champignons à arbuscules sans la plante-hôte, les mécanismes biochimiques et moléculaires se produisant au cours de cet échange de nutriments sont encore mal connus. Le phosphate est généralement présent en faible concentration dans le sol et requis en relativement grande quantité par la plante. Une activité phosphatase alcaline (PA) a été détectée dans les mycorhizes à arbuscules et est considérée comme un marqueur physiologique potentiel de l'efficacité des mycorhizes en termes d'amélioration de la croissance de la plante. Le but de ce travail était de purifier une PA à partir de racines mycorhizées pour étudier ses propriétés et pour obtenir des informations sur sa séquence d'acides aminés. Les PA de G. Microaggregatum BEG 56 et G. Mosseae BEG 12 ont été partiellement purifiées et caractérisées. Elles sont hydrophobes et glycosylées et ont un poids moléculaire apparent de 70 kDa. Elles semblent être constituées par une famille d'isoformes dont les points isoélectriques sont compris entre 3. 5 et 6. 0. La PA de Glomus microaggregatum BEG 56 est inhibée par le β-mercaptoéthanol mais stabilisée par les ions Zn 2 + ou Co 2 +. De plus, elle n'est pas spécifique mais présente des activités monophosphoestérase, pyrophosphatase, et tripolyphosphatase. Un peptide de 12 acides aminés d'une des isoformes de la PA de G. Mosseae BEG 12 a été déterminé. Un essai de clonage de l’ADNc d'une PA spécifique de la mycorhize à arbuscules a été réalisé. Les perspectives de ce travail sont de produire un anticorps contre le peptide qui a été séquencé pour cribler une banque d'expression d’ADNc préparée à partir de racines mycorhizées, ce qui permettrait d'obtenir une sonde oligonucléotidique pour suivre l'expression de la PA au cours de la symbiose.