Abstract FR:

La lignée de cellules recombinantes EG6 a été clonée à partir de cellules NIH-3T3, co-transfectées par les plasmides pEJ porteur de l'oncogène cellulaire Ha-ras EJ et p17hGHdhfr vecteur du gène de l'hGH dont l'expression est placée sous le contrôle du promoteur du gène de la protéine de choc thermique de 70 kDa (hsp70). Nous avons étudié les différents paramètres qui régissent le développement des cultures dans des biogénérateurs de laboratoire et dans un biogénérateur pilote, sur des microporteurs de type Cytodex nd et Cultispher Gnd. La transformation des cellules EG6 qui fait suite à l'incorporation de l'oncogène Ha-ras EJ au sein du génome cellulaire permet d'obtenir un fort potentiel de croissance. Ainsi de larges inoculums atteignant 10 9 cellules sont préparés en une dizaine de jours, par multiplication in vivo après transplantation s. C. De 10 6 cellules chez une souris nude. La transformation cellulaire a rendu les cellules EG6 indépendantes des principaux facteurs de croissance hormis l'insuline biogénétique, ce qui autorise des cultures dans un milieu sans sérum et sans protéine (SPFM). Les meilleurs taux de synthèse de l'hGH induits après un choc thermique sont de l'ordre du mg/1/24 h. L'établissement d'un profil de chocs thermiques appliqués à la même culture permet une sécrétion de l'hGH de manière répétitive tout en maintenant une très bonne viabilité cellulaire. Le promoteur hsp70 est donc tout a fait compatible avec la culture de cellules en masse et la production de fortes quantités d'hGH dans le SPFM.