Abstract FR:

Une banque genomique de rhodobacter capsulatus a ete construite a partir de fragments d'adn de 40 kb clones dans le cosmide phc79. Le cosmide pbc2, isole par hybridation de colonies, porte une region hup de 17 kb qui contient a la fois des genes de regulation ou de maturation et les genes de structure de l'hydrogenase. En aval des genes de structure de l'hydrogenase (hups et hupl) une troisieme phase ouverte de lecture (hupm) a ete trouvee par sequencage. Ce gene coderait pour une proteine hydrophobe de 30 kda et semble appartenir a l'operon hupsl. L'etude des transcrits de l'hydrogenase de r. Capsulatus a ete abordee pour verifier l'expression de hupm et l'organisation en operon des trois phases ouvertes de lecture hupslm. En raison de la grande instabilite de l'arnm, la taille du ou des transcrits n'a pu etre determinee. Mais, ces experiences ont montre que hupm est transcrit dans les memes conditions que les genes de structure de l'hydrogenase. Pour determiner le role de la proteine hupm, deux mutations plasmidiques obtenues par insertion d'une cassette de resistance a la kanamycine dans le gene hupm, ont ete integrees dans le chromosome. L'activite hydrogenase des mutants est tres differente de celle de l'enzyme sauvage. In vitro cette activite est forte, instable et accessible au benzyl viologene sur cellules entieres. In vivo elle n'assure pas la croissance des cellules en autotrophie, ni le transfert des electrons de l'hydrogene vers la chaine respiratoire. Par complementation des mutants nous avons montre que hupm est transcrit a partir du promoteur des genes de structure de l'hydrogenase: hupslm constitue un seul operon