Abstract FR:

I) en procedant a des pontages covalents arn-proteine par irradiation uv (254 m) dans une reaction d'epissage in vitro, nous avons remarque qu'une proteine de 65 kd (p65) interagit specifiquement avec le bloc de pyrimidines des introns. L'utilisation d'un arn pre-messager chimere, dans des experiences de pontage uv couplees a des immunoprecipitations par des anticorps anti-snrnps, a permis de montrer que p65 est impliquee dans l'interaction entre la snrnp u2 et l'arn pre-messager et que la sequence 5 terminale du snrna u2 est indispensable pour que le contact entre p65 et la snrnp u2 s'etablisse. Ii) grace a des experiences d'immunoprecipitations et d'immunoselection de fragments resistants a l'arnase t1, nous avons montre que les snrnps u1 et u2 entrent en interaction en presence d'un arn ne contenant, de tous les sites remarquables d'un intron, que la sequence d'epissage 5 consensus. Par des experiences de chromatographie d'affinite, nous avons etabli que la snrnp u1 peut encore interagir specifiquement avec un site d'epissage 5 lorsque l'extremite 5 de son snrna est clivee. Une proteine de 46 kd pourrait etre responsable de cette interaction. Iii) en remplacant l'atp par des analogues hydrolysables (atp alpha s et atp gamma s), nous avons demontre qu'il existe deux modes d'utilisation de l'atp pendant l'epissage; celui-ci est en effet hydrolyse par des atpases et utilise par des proteines kinases. Nous aboutissons a la conclusion que plusieurs facteurs doivent subir des cycles de phosphorylation-dephosphorylation au cours de l'epissage