Contribution à l'étude de la levure émergente C. Glabrata : développement d'un modèle murin de dissémination hématogène à point de départ digestif et construction de souches bioluminescentes
Institution:
Paris 6Disciplines:
Directors:
Abstract EN:
Invasive candidiasis is actually the most frequent fungal infection in immunocompromised patients, with a mortality rate often overpassing 50%. Candida glabrata is the second pathogen in cause of the infection; nevertheless the exact mechanisms of its pathogenicity are yet poorly understood. Thus, this project aimed the better understanding of the pathogen by developing new tools for its study, in particular the establishment of an animal model with oral route of inoculation and the construction of bioluminescent reporter strains. A mouse animal model of colonization and dissemination was established that closely reproduces human infection. The experimental protocol includes hypoprotein diet that facilitates colonization end a 5 days chemotherapy regimen that induces dissemination. In this model liver is the principal target of the infection and mortality rate of 100% can be observed. The protocol was successfully applied to the study of potential virulence factors such as MAT type, adhesion and “petite” mutation. A second part of my work consisted in the construction of bioluminescent strains for real-time tracking of candidiasis. One of the two reporter strains obtained was validated in vitro as well as in vivo and its detection limit was determined in vivo. The strain was afterwards applied to a preliminary study of CCR1 and CCR2 chemokine receptor and their importance in controlling C. Glabrata dissemination
Abstract FR:
La candidose disséminée est l’infection fongique la plus répandue chez les patients immunodéficients avec une mortalité souvent supérieur à 50%. Candida glabrata est le deuxième agent responsable de cette infection après C. Albicans. Cette levure reste peu étudiée et mécanismes exacts de sa pathogénicité sont mal connus. Dès lors, le projet présenté visait à l’étude de ce pathogène par la mise en place de différents outils, notamment un modèle murin de candidose invasive à point de départ digestif et la construction de souches rapporteurs pour la détection de la levure in vivo au cours de l’infection. Nous avons mis en place un modèle murin de colonisation et dissémination de C. Glabrata qui reproduit l’infection chez le patient. Le modèle comprend un régime hypoprotéique facilitant la colonisation de l’hôte par cette levure et une chimiothérapie de 5 jours qui assure sa dissémination. Il se caractérise par une dissémination précoce dans le foie, la principale cible de l’infection, et une mortalité qui peut atteindre 100%. Ce modèle a été appliqué à l’étude de facteurs potentiels de virulence, tels le type sexué MAT, l’adhérence et la mutation « petite ». Dans un deuxième temps, des souches bioluminescentes ont été construites permettant un suivi en temps réel de l’infection. L’une de ces souches a été validée in vitro et in vivo avec une détermination du seuil de détection de la luminescence in vivo. Cette souche luminescente a été utilisé dans l’étude préliminaire du rôle des récepteurs de chimiokines CCR1 et CCR2 dans le contrôle de la candidose invasive